二代測序的建庫步驟⑤

五、文庫富集（可選步驟）

PCR富集：對于一些起始樣本量較少或者連接效率較低的情況，可能需要進(jìn)行PCR富集。利用與接頭序列互補的引物進(jìn)行PCR擴增，增加文庫中目標(biāo)DNA片段的數(shù)量。在PCR反應(yīng)中，需要注意引物的設(shè)計要與接頭序列準(zhǔn)確匹配，并且要優(yōu)化PCR循環(huán)數(shù)，避免過度擴增導(dǎo)致文庫多樣性降低或引入PCR偏差。一般會通過預(yù)實驗確定合適的PCR循環(huán)數(shù)，例如從10-15個循環(huán)開始嘗試，通過檢測擴增產(chǎn)物的量和質(zhì)量來調(diào)整循環(huán)數(shù)。 二代測序產(chǎn)出的數(shù)據(jù)量有多少？北京嘉安健達(dá)二代測序

什么樣本可以做二代測序？③

細(xì)胞樣本

培養(yǎng)細(xì)胞：包括各種原代培養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞系。在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中，對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行測序可以了解細(xì)胞的基因特征和功能變化。例如，在研究細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路時，對經(jīng)過特定刺激處理的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，以分析基因表達(dá)的上調(diào)或下調(diào)情況。

脫落細(xì)胞：如痰液中的脫落細(xì)胞、尿液中的脫落細(xì)胞等。這些細(xì)胞可以用于某些疾病的篩查。例如，在肺*篩查中，對痰液中的脫落細(xì)胞進(jìn)行基因檢測，通過二代測序?qū)ふ曳?相關(guān)的基因突變，作為一種非侵入性的檢測方法。 新疆嘉安健達(dá)二代測序原理二代測序讀長方面比一代測序短很多。

二代測序技術(shù)的一些***研究進(jìn)展①

疾病診斷與***領(lǐng)域 ：消化系統(tǒng)**標(biāo)志物檢測：2024 年的**共識指出，二代測序（NGS）技術(shù)可同時檢測消化系統(tǒng)**中的多種標(biāo)志物，如錯配修復(fù)基因變異、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）狀態(tài)、**突變負(fù)荷（TMB）等，為**的精細(xì)***提供了更***、準(zhǔn)確的信息。例如，MSI-H 的實體瘤患者可使用帕博利珠單抗進(jìn)行***，而 NGS 技術(shù)能更好地檢測 MSI 狀態(tài)及相關(guān)耐藥機制。

**液體活檢：通過檢測血液中的循環(huán)** DNA（ctDNA）等標(biāo)志物，實現(xiàn)對**的早期篩查、診斷和***監(jiān)測。NGS 技術(shù)能夠更敏感地檢測到 ctDNA 中的基因突變和變異，為**的無創(chuàng)診斷提供了有力支持。

二代測序不同應(yīng)用場景下的速度有多快？

病原微生物檢測：一般來說，二代測序用于檢測病原微生物時，能夠在幾個小時到一天左右出結(jié)果。比如在快速檢測血液中的病原微生物時，通?？梢栽趲讉€小時內(nèi)獲得檢測結(jié)果，相比傳統(tǒng)的血液培養(yǎng)方法，時間大幅縮短，傳統(tǒng)血液培養(yǎng)一般需要幾天到一周的時間 。

全基因組測序：如果是對人類全基因組進(jìn)行測序，以目前的技術(shù)水平，使用二代測序技術(shù)完成一個人的全基因組測序，一般需要 1-2 天左右的時間。而在十幾年前，人類全基因組測序計劃***完成時，耗費了大量的時間和精力，相比之下二代測序技術(shù)的速度提升***。

轉(zhuǎn)錄組測序：轉(zhuǎn)錄組測序的時間相對較短，一般幾個小時內(nèi)可以完成對大量 RNA 分子的測序和初步數(shù)據(jù)分析，進(jìn)而快速了解基因在特定條件下的表達(dá)情況8. 二代測序的優(yōu)勢是高準(zhǔn)確性。

什么樣本可以做二代測序？④

4、口腔樣本

口腔拭子：通過刮取口腔黏膜細(xì)胞來獲取樣本?？谇皇米硬杉奖?、無創(chuàng)，可用于DNA提取和基因檢測。例如，在法醫(yī)鑒定中，口腔拭子是常用的樣本來源，用于個體身份識別和親子關(guān)系鑒定等；在一些大規(guī)模的人群基因篩查項目中，也可以使用口腔拭子來收集樣本。

5、糞便樣本

糞便中含有腸道微生物、腸道上皮細(xì)胞等成分。對糞便樣本進(jìn)行宏基因組測序，可以研究腸道微生物群落的組成、功能和多樣性。例如，在腸道疾?。ㄈ缪装Y性腸病、結(jié)直腸*等）的研究中，分析糞便中微生物群落結(jié)構(gòu)的變化，以及微生物基因的表達(dá)情況，有助于了解疾病的發(fā)病機制和尋找潛在的生物標(biāo)志物。 宏基因組測序是二代測序嗎？青海嘉安健達(dá)二代測序應(yīng)用

二代測序通量大，可以產(chǎn)生上G的reads.北京嘉安健達(dá)二代測序

二代測序—全外顯子測序的優(yōu)勢

針對性強：它主要聚焦于基因組中編碼蛋白質(zhì)的區(qū)域，這部分區(qū)域雖然只占整個基因組的 1 - 2% 左右，但包含了大部分與疾病相關(guān)的突變。例如，在研究孟德爾遺傳病時，很多致病突變都位于外顯子區(qū)域，通過全外顯子測序可以更高效地找到這些突變。

成本效益高：相比于全基因組測序，全外顯子測序的成本相對較低。因為它不需要對整個基因組（包括大量的非編碼區(qū)域）進(jìn)行測序，在一定程度上減少了數(shù)據(jù)量和測序成本，同時又能獲取大部分有重要功能意義的遺傳信息。 北京嘉安健達(dá)二代測序