宏基因組二代測序，你了解多少？

宏基因組二代測序（mNGS）是一項覆蓋病原譜廣且高通量的檢測技術(shù)，已在臨床領(lǐng)域得到了廣泛的應用。對于血液病患者，病原mNGS通過對樣本快速高通量測序，可以獲得更準確、相對無偏倚的病原信息，對病原診斷起到積極的作用，尤其對傳統(tǒng)微生物學檢測未覆蓋到或檢測周期較長、陽性率較低的病原可提高檢出率。對于臨床相關(guān)樣本應首先完善傳統(tǒng)微生物學檢測，病理、無菌標本培養(yǎng)仍然是診斷的金標準，病原mNGS是對傳統(tǒng)微生物學檢測的有力補充和延展而非替代。病原mNGS的報告解讀應充分評估檢出微生物的致病性、流行病學、生物信息學信息，同時在結(jié)合患者臨床特征的基礎上進行綜合判斷。 二代測序是一種能夠同時對數(shù)百萬甚至數(shù)十個億DNA片段進行測序的方法。河南嘉安健達二代測序提供

二代測序的操作流程有哪些？

1.DNA提取與質(zhì)檢

· 純凈、足量、質(zhì)量好的樣本DNA是檢測成功的基礎（可以來源于血漿、新鮮組織等）

2.DNA處理→文庫構(gòu)建

· 得到統(tǒng)一長度區(qū)間+有接頭的DNA片段

· 步驟：DNA打斷→末端修復→片段篩選→加A尾→接頭連接→PCR

3.靶向捕獲

· 特定區(qū)域基因的定向檢測

4.上機測序

· 根據(jù)通量情況選擇測序儀

· 上樣后機器完成

5.數(shù)據(jù)分析

· 初級分析：光強數(shù)據(jù)（不同熒光標記堿基）→序列信息（AGCT）

· 二級分析 多儀器自帶

· 三級分析 vcf文件 可diy 南京哪里有二代測序分析基因組重測序是二代測序嗎？

二代測序——轉(zhuǎn)錄組測序的應用領(lǐng)域

1、基礎生物學研究：可以用于研究生物的發(fā)育過程。例如，在胚胎發(fā)育過程中，通過轉(zhuǎn)錄組測序可以了解不同階段胚胎細胞中基因的表達變化，揭示胚胎發(fā)育的分子機制。還可以用于物種進化研究，比較不同物種間轉(zhuǎn)錄組的差異，推斷基因表達的進化模式。

2、醫(yī)學研究和臨床診斷：在疾病研究方面，用于尋找疾病相關(guān)的生物標志物。例如，在**研究中，通過對比**組織和正常組織的轉(zhuǎn)錄組，可以發(fā)現(xiàn)一些在**中特異性高表達或低表達的基因，這些基因有望成為**診斷、預后判斷的標志物。同時，也可以用于藥物研發(fā)，通過轉(zhuǎn)錄組測序了解藥物作用后細胞基因表達的變化，評估藥物療效和毒性。

3、農(nóng)業(yè)和植物學研究：在作物育種中，可以研究不同品種作物在抗逆性（如抗旱、抗寒、抗?。┑确矫娴幕虮磉_差異，為培育優(yōu)良品種提供理論依據(jù)。在植物生長發(fā)育研究中，分析植物在不同生長環(huán)境和生長階段的轉(zhuǎn)錄組變化，了解植物***等因素對植物生長的調(diào)控機制。

什么樣本可以做二代測序？③

細胞樣本

培養(yǎng)細胞：包括各種原代培養(yǎng)細胞和細胞系。在基礎醫(yī)學研究中，對培養(yǎng)的細胞進行測序可以了解細胞的基因特征和功能變化。例如，在研究細胞信號轉(zhuǎn)導通路時，對經(jīng)過特定刺激處理的培養(yǎng)細胞進行轉(zhuǎn)錄組測序，以分析基因表達的上調(diào)或下調(diào)情況。

脫落細胞：如痰液中的脫落細胞、尿液中的脫落細胞等。這些細胞可以用于某些疾病的篩查。例如，在肺*篩查中，對痰液中的脫落細胞進行基因檢測，通過二代測序?qū)ふ曳?相關(guān)的基因突變，作為一種非侵入性的檢測方法。 二代測序是為了改進一代測序通量過低的問題而出現(xiàn)的。

二代測序——RNA甲基化的概念、作用和檢測方法

RNA 甲基化概念及位置：RNA 甲基化是在 RNA 分子上添加甲基基團，其中 N6 - 甲基腺苷（m6A）是最常見的一種 RNA 甲基化修飾形式，它主要發(fā)生在 mRNA（信使 RNA）的腺嘌呤（A）殘基上。

作用

1、影響 RNA 的穩(wěn)定性：m6A 修飾可以影響 mRNA 的穩(wěn)定性。例如，一些帶有 m6A 修飾的 mRNA 更容易被降解，從而調(diào)控基因表達的時間和水平。2、調(diào)節(jié) RNA 的剪接和翻譯：m6A 修飾還能夠調(diào)節(jié) mRNA 的剪接過程，影響不同轉(zhuǎn)錄本的生成。同時，它也可以在翻譯水平上發(fā)揮作用，影響蛋白質(zhì)合成的效率。

檢測方法

甲基化 RNA 免疫沉淀測序（MeRIP - Seq）：這種方法主要是利用特異性識別 m6A 修飾的抗體，對 RNA 進行免疫沉淀富集，然后通過高通量測序來鑒定 m6A 修飾的位點和水平。 二代和三代測序的區(qū)別？西藏二代測序應用

二代測序的優(yōu)勢是高靈敏度。河南嘉安健達二代測序提供

一代、二代、三代測序的區(qū)別分別是什么？

一代測序是上世紀70年代由Sanger和Coulson開創(chuàng)的DNA雙脫氧鏈終止法測序，也稱為Sanger測序。

二代測序技術(shù)(NGS)是為了改進一代測序通量過低的問題而出現(xiàn)的，能夠同時對上百萬甚至數(shù)十億個DNA分子進行測序?qū)崿F(xiàn)了大規(guī)模、高通量測序的目標。

三代測序主要有兩種技術(shù)PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore 的納米孔單分子測序技術(shù)，這兩種技術(shù)的測序讀長都可以達到幾-kb的級別，遠遠高于二代測序技術(shù)。 河南嘉安健達二代測序提供