紫外-可見分光光度計是基于紫外可見分光光度法原理,利用物質分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射吸收來進行分析的一種分析儀器。主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。其工作原理為分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構,其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎。本文介紹的是日立U-3010型號紫外分光光度計的使用方法。日立U-3010型號紫外分光光度計的使用1.開電源,先開U-3010電源,再啟動電腦2.點擊桌面上UV,啟動程序3.點擊method窗口,將會出現(xiàn)GeneralQuantitationinstrumentMonitorReport五個對話框,如下圖所示:4.設置(1)General對話框;(2)Quantitation對話框,如果測波長選擇wavelength,數(shù)量可選多個,比如測定:260nm,280nm,230nm,則選擇3個;如圖所示:(3)Instrument對話框,將你要測定的波長值依次輸入框內(nèi);(4)設置好后,點確定鍵5.放入空白對照。光度計的應用范圍十分廣闊。福建可見分光光度計教程
在測量準確性和精確度時,將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi)。將測得的輸出吸光度值與允許值范圍比較。在檢查波長時,測定三個測試濾光片在對應波長(260nm、280nm和800nm)下的吸光度,以確定每個波長的變異系數(shù)。許多分光光度計,都帶有一個特殊的功能——自檢。建議用戶至少每周運行一次自檢,但自動自檢的頻率可根據(jù)需要進行設定。自檢主要檢查儀器的幾個部分。它通過測定現(xiàn)有波長的隨機誤差來校驗檢測器,通過檢查大能量、隨機誤差、基準傳感器的信號和光強度來校驗光源。四川光度計使用光度計的制作方法難嗎?上海元析告訴您。
儀器使用頻繁,但甚少見到有人維護。其實,保持分光光度計清潔、無污染是成功操作的關鍵。清潔儀器我們應該用蘸有中性清潔劑的軟布擦拭分光光度計的表面。刺激性的清潔劑可能會損壞儀器表面。你也可以清潔比色皿本身。比色皿插槽只能用蘸有乙醇或異丙醇的無絨棉簽來清潔。這可防止液體進入內(nèi)部。如果你必須要用水清潔,那么可用蘸有乙醇或異丙醇的棉簽來加速干燥。比色皿插槽的蓋子也可以清潔,但不是泡在清潔劑中。如有必要,拆下蓋子,用蘸有溫和清潔劑的軟布或無絨棉簽來清潔。此外,平時不使用時,應蓋上比色皿插槽的蓋子,以免灰塵或其他污染物落入。消毒和凈化如果分光光度計被微生物所污染,那么可采用下列步驟進行消毒和凈化。首先,利用溫和的清潔劑來清潔設備。然后,用蘸有消毒劑(通常是酒精溶液)的軟布擦拭表面。如有必要,拆下并清潔比色皿插槽。檢查組件維護的另一方面在于檢查分光光度計的光度準確性。Eppendorf提供了一個濾光片系統(tǒng)(BioSpectrometerreferencefilterkit),以評估光度準確性和系統(tǒng)的波長誤差。
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。分光光度計的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實驗精確要求的光譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。為了測量吸光值,分光光度計制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二極管。上海光度計的特點分析;
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長情況。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波長下測量樣品。果果需要更大的靈活性,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,可以程序性地進行ELISAs分析和比色分析。紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長,通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學和半導體研究需要的光譜范圍。光度計有哪些種類?上海元析告訴您。湖南分光光度計教程
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并發(fā)現(xiàn)吸收光譜相似的有機物質,它們的結構也相似。并且,可以解釋用化學方法所不能說明的分子結構問題,初步建立了紫外可見分光光度計的理論基礎,以此推動了紫外可見分光光度計的發(fā)展。1918年美國國家標準局研制成了世界上diyi臺紫外可見分光光度計(不是商品儀器,很不成熟)。此后,紫外可見分光光度計很快在各個領域的分析工作中得到了應用。朗伯早在1760年就發(fā)現(xiàn)物質對光的吸收與物質的厚度成正比,后被人們稱之為朗伯定律;比耳在1852年又發(fā)現(xiàn)物質對光的吸收與物質濃度成正比,后被人們稱之為比耳定律。在應用中,人們把朗伯定律和比耳定律聯(lián)合起來,又稱之為朗伯-比耳定律。隨后,人們開始重視研究物質對光的吸收,并試圖在物質的定性、定量分析方面予以使用。因此,許多科學家開始研究以比耳定律為理論基礎的儀器裝置。經(jīng)過一個漫長的時期后,美國Beckman公司于1945年,推出世界上diyi臺成熟的紫外可見分光光度計商品儀器。從此,紫外可見分光光度計的應用開始得到飛速發(fā)展。紫外可見分光光度計的展望紫外可見分光光度計雖然是一類有著很長歷史的分析儀器,但每一次吸收了新的技術成果都使它煥發(fā)出新的活力。福建可見分光光度計教程
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