PMTs提供快速的反應(yīng)時(shí)間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測(cè)量。在大部分的樣品類型中,分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室需求。但盡管對(duì)于小實(shí)驗(yàn)室來說,制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。用小試管cuvette裝樣品容量一般從1μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品的固定物來滿足各種改變需要。單光束紫外可見分光光度計(jì)操作麻煩,不適合定性分析。廣西可見分光分光光度計(jì)原理
紫外可見分光光度計(jì)有著較長的歷史,其主要理論框架早已建立,制作技術(shù)相對(duì)成熟。目前,紫外可見分光光度計(jì)在追求準(zhǔn)確、快速、可靠的同時(shí),小型化、智能化、在線化、網(wǎng)絡(luò)化成為了現(xiàn)代紫外可見分光光度計(jì)新的增長點(diǎn)。紫外可見分光光度計(jì)的發(fā)展歷史分光光度法始于牛頓。早在1665年牛頓做了一個(gè)實(shí)驗(yàn):他讓太陽光透過暗室窗上的小圓孔,在室內(nèi)形成很細(xì)的太陽光束,該光束經(jīng)棱鏡色散后,在墻壁上呈現(xiàn)紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫的色帶。這色帶就稱為“光譜”。1815年夫瑯和費(fèi)仔細(xì)觀察了太陽光譜,發(fā)現(xiàn)太陽光譜中有600多條暗線,并且對(duì)主要的8條暗線標(biāo)以A、B、C、D…H的符號(hào)。這就是人們Z早知道的吸收光譜線,被稱為“夫瑯和費(fèi)線”。但當(dāng)時(shí)對(duì)這些線還不能作出正確的解釋。1859年本生和基爾霍夫發(fā)現(xiàn)由食鹽發(fā)出的黃色譜線的波長和“夫瑯和費(fèi)線”中的D線波長完全一致,才知一種物質(zhì)所發(fā)射的光波長(或頻率),與它所能吸收的波長(或頻率)是一致的。1862年密勒應(yīng)用石英攝譜儀測(cè)定了一百多種物質(zhì)的紫外吸收光譜。他把光譜圖表從可見區(qū)擴(kuò)展到了紫外區(qū),并指出:吸收光譜不只與組成物質(zhì)的基團(tuán)質(zhì)有關(guān)。接著,哈托萊和貝利等人,又研究了各種溶液對(duì)不同波段的截止波長。江西國產(chǎn)分光光度計(jì)原理分光光度計(jì)的單色器則有玻璃、石英、熒石、巖鹽和其它堿金屬鹵化物制成的棱鏡以及繞射光柵和反射光柵等。
分光光度法原理要求照射在樣品池上的單色光必須對(duì)應(yīng)于樣品吸收光譜中的某一個(gè)吸收峰的波長。由于儀器的制造和調(diào)整誤差,單色光的實(shí)際波長與儀器的波長讀數(shù)值間都存在一定的誤差。樣品中絕大部分的主要吸收峰都有一定的寬度,對(duì)波長準(zhǔn)確度要求允許寬些。但是,當(dāng)吸收峰寬度較小,而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,此時(shí)波長準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測(cè)試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
由于儀器的制造和調(diào)整誤差,單色光的實(shí)際波長與儀器的波長讀數(shù)值間都存在一定的誤差。但是,當(dāng)吸收峰寬度較小,而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,此時(shí)波長準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。2、透射比(吸光度)準(zhǔn)確度很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測(cè)試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。3、雜散光雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機(jī)械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強(qiáng)度和檢測(cè)器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。因此,雜散光的大小也是儀器性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。使用與維護(hù)1、若大幅度改變測(cè)試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。2、指針式儀器在未接通電源時(shí),電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。3、比色皿使用完畢后,請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。4、操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈。不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為分光光度計(jì)的光源。
一般來說,紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類。顧名思義,單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測(cè)量。一束給定波長的光通過對(duì)照物,然后再通過實(shí)際樣品溶液,就能得到吸光結(jié)果。雙光束型則是通過一個(gè)斬光輪(mirroredchopperwheel)將一束光分成兩束,分別測(cè)量對(duì)照樣品和實(shí)際樣品。可以較小化光漂移(lampdrift)和減少測(cè)量時(shí)間。一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測(cè)量對(duì)照樣品和目的樣品。因?yàn)樵黾恿藴y(cè)量的速度,所以雙光束分光光度計(jì)在測(cè)量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。超微量分光光度計(jì)的基本原理是基于光與物質(zhì)之間的相互作用。重慶分光分光光度計(jì)
普通分光光度計(jì)的帶寬為5~10nm。廣西可見分光分光光度計(jì)原理
試劑盒包含一個(gè)空白濾光片、三個(gè)檢查光度的濾光片和三個(gè)校正波長的濾光片。每個(gè)濾光片的吸光值是相對(duì)空白濾光片測(cè)定的。這個(gè)試劑盒不僅能讓用戶獲得測(cè)量準(zhǔn)確性的信息,也能提供精確度的信息,包括平均值和變異系數(shù)。在測(cè)量準(zhǔn)確性和精確度時(shí),將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi)。將測(cè)得的輸出吸光度值與允許值范圍比較。在檢查波長時(shí),測(cè)定三個(gè)測(cè)試濾光片在對(duì)應(yīng)波長(260nm、280nm和800nm)下的吸光度,以確定每個(gè)波長的變異系數(shù)。**后,許多分光光度計(jì),包括Eppendorf的所有儀器,都帶有一個(gè)特殊的功能——自檢。Eppendorf建議用戶至少每周運(yùn)行一次自檢,但自動(dòng)自檢的頻率可根據(jù)需要進(jìn)行設(shè)定。自檢主要檢查儀器的幾個(gè)部分。它通過測(cè)定現(xiàn)有波長的隨機(jī)誤差來校驗(yàn)檢測(cè)器,通過檢查**大能量、隨機(jī)誤差、基準(zhǔn)傳感器的信號(hào)和光強(qiáng)度來校驗(yàn)光源。**后,它還通過測(cè)定紫外光譜范圍內(nèi)強(qiáng)度峰值位置的精確度來確定波長的系統(tǒng)及隨機(jī)誤差。遵照這些建議來維護(hù)分光光度計(jì),那么在今后的使用過程中再也不用擔(dān)心測(cè)量結(jié)果有問題啦。(來源:互聯(lián)網(wǎng)整理)(圖片來源:Pixabay)上周看點(diǎn)2832萬大單!山一大公開采購成像分析系統(tǒng)等設(shè)備刷瓶子!實(shí)驗(yàn)室新人的共同回憶……趣味科普丨?。V西可見分光分光光度計(jì)原理
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