免疫組化如何才能充分脫蠟?
(1)蠟不溶于水,如果脫蠟不干凈,少許蠟存留于切片上,將會引起染色不均勻、陽性物時隱時現(xiàn)、真假難辨、背景染色增加等。為了解決上述的問題,切片在染色前必須徹底脫蠟,目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯,因它脫蠟力強,脫蠟時間較短;
(2)脫蠟的時間要根據(jù)季節(jié),室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天,室溫較高,脫蠟試劑也新鮮,則脫蠟時間不需很多,3-5分鐘就已足夠。如果在冬天,室溫較低,脫蠟試劑也較陳舊,則脫蠟時間需要延長,10-20分鐘或更長。
(3)當天切的切片,燒烤2小時后進行染色,切片帶有溫度進行脫蠟這將可加速脫蠟的過程,如果預先切好烤好的切片,在染色前,還必須對切片進行加溫10-20分鐘,然后再行脫蠟,這樣脫蠟速度加快,效果魁偉更好??傊?,操作時應根據(jù)不同的季節(jié),不同的室溫,不同的試劑來決定,脫蠟的時間,原則上是要徹底、干凈、完全地脫去切片上的蠟。
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免疫組化指的是根據(jù)抗體與抗原特異結合的原理來檢測組織切片中的抗原(如蛋白)。immuno的詞根來自操作中所使用的抗體,而histo意味著組織。另一種類似的技術是免疫細胞化學(Immunocytochemistry,簡稱ICC)。這兩個詞大家經(jīng)?;熘茫粗孟癫畈欢?,但實際上還是有點區(qū)別。IHCvsICC對于IHC,組織是來自患者或動物,經(jīng)過冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片,封片后再處理。通過這種方法,研究人員可觀察細胞組分的定位,同時維持周圍組織的原先結構。對于ICC,大部分細胞外基質及其他基質組分被去除,只剩下整個細胞來染色。ICC的來源可以是細胞懸液,來自患者或動物(如血涂片、拭子等),或在實驗室中進行的組織培養(yǎng)細胞系。 江蘇小鼠免疫組化實驗英瀚斯生物免疫組化,高效高質量出結果。
免疫組化在什么情況下進行組織抗原修復,抗原修復的條件是什么?
(1)由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中,發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用,從而失去抗原性。通過抗原修復,使得細胞內抗原決定族重新暴露,提高抗原檢測率。
(2)修復方法從強到弱一般分為三種,高壓修復、微波修復、胰酶修復。修復液也分為若干種(具體的可以查閱相關資料,大量的:中性的、高pH的等)。
(3)微波修復,我們一般用6min*4次,效果不錯。
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免疫組化結果背景染色較深的原因有哪些?
(1)抗體濃度過高:一抗?jié)舛冗^高是常見的原因之一。解決辦法是,每次使用新抗體前應當對其工作濃度進行測試,使每一抗體個體化,找到適合自己實驗室的理想工作濃度,既使是即用型的抗體也應如此,不能只簡單的按說明書進行染色。
(2)抗體孵育時間過長或溫度較高:解決辦法是,嚴格執(zhí)行操作規(guī)程,比較好隨身佩帶報時表或報時鐘,及時提醒,避免因遺忘而造成時間延長?,F(xiàn)在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的時間不是傳統(tǒng)的1小時,而是30分鐘,因此,要根據(jù)染色結果進行調整。
(3)DAB變質和顯色時間太長:DAB比較好現(xiàn)用現(xiàn)配,如有沉渣應進行過濾后再用。配制好的DAB不應存放時間太長,因為在沒有酶的情況下,過氧化氫也會游離出氧原子與DAB產(chǎn)生反應而降低DAB的效力,未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的。DAB的顯色比較好在顯微鏡下監(jiān)控,達到理想的染色程度時立即終止反應。但是當染**太多時或用染色機時,這樣做似乎不現(xiàn)實,但至少應對一些新的或少用的抗體顯色時進行監(jiān)控,避免顯色時間過長。
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在臨床應用中,免疫組化還可以進一步分類不同qi官與組織交界處cancer。由于重疊的特征,在一些組織qi官交界處的cancer,只憑組織學基礎對cancer進行分類很困難。如胃腸道梭形細胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤,是間質起源的胃腸道間質瘤(GIST),還是神經(jīng)起源的神經(jīng)鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細胞cancer,兩者較難區(qū)別,且醫(yī)療與預后明顯的不同,但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細胞cancer,而角蛋白陽性則為胚胎cancer。英瀚斯生物實驗外包,多種病理染色熟練掌握,可做免疫組化!寧夏病理免疫組化要多久
免疫組化可以看什么?吉林動物組織免疫組化價格
免疫組化(IHC)利用抗體檢測組織切片中蛋白質和其他抗原的定位。
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抗體-抗原的相互作用通過有色酶底物顯色檢測或熒光染料熒光檢測進行觀察。雖然IHC在定量方面不如蛋白質印跡或ELISA,但是IHC可以提供完整組織中蛋白定位的寶貴信息。蛋白表達譜對病理學家以及作為診斷工具都具有重要意義。
IHC實驗成功的關鍵在于穩(wěn)定、優(yōu)化且可重復的染色方案,而該方案應使用高質量的特異性試劑。 吉林動物組織免疫組化價格