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血漿血清外泌體提取試劑盒

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-12

外泌體提取在短時(shí)間(一周之內(nèi))使用,可以放在4度保存,如果長(zhǎng)時(shí)間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進(jìn)行分裝,分別放在-20度或-80度。外泌體檢測(cè)方法:外泌體分離之后,需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定。l、透射電鏡鑒定法:簡(jiǎn)稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。2、納米顆粒追蹤分析法:簡(jiǎn)稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快,檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息。度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高。血漿血清外泌體提取試劑盒

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NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,用激光光束穿過(guò)樣本,激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,通過(guò)裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,捕捉外泌體的布朗運(yùn)動(dòng),實(shí)現(xiàn)顆粒可視化。然后使用Stokes-Einstein方程來(lái)測(cè)量粒子的平均速度,繼而估算粒子的大小。NTA能夠測(cè)量粒徑10-1000nm之間的顆粒,包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),另外,NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體,因此無(wú)法排除其他物質(zhì)的干擾。福建外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)。

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外泌體的來(lái)源與特征:外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,其大小均一,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類(lèi)型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,可作為疾病診斷標(biāo)記物、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。

外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成。它也由各種類(lèi)型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細(xì)胞。根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫(kù)ExoCarta的資料,目前已知約有8000種蛋白質(zhì)和194種脂質(zhì)與外泌體相關(guān)。外泌體通過(guò)生物體液被多種不同類(lèi)型的細(xì)胞分泌,包括滑膜液,母乳,血液,尿液,唾液,羊水和血液中的血清,這表明它們?cè)诩?xì)胞間通訊和觸發(fā)生理反應(yīng)中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過(guò)程中去除不必要的蛋白質(zhì)。簡(jiǎn)而言之,它們是天然膜囊泡,將蛋白質(zhì),RNA,DNA和脂質(zhì)從一個(gè)細(xì)胞攜帶到另一個(gè)細(xì)胞,從而調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物功能。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類(lèi)型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放。

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透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評(píng)估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見(jiàn)的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測(cè)電子類(lèi)別,在SEM中,電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,捕獲并檢測(cè)散射的電子,從而生成粒子圖像。但是,在TEM中,不與粒子相互作用的電子穿過(guò)樣品,并使用熒光屏進(jìn)行檢測(cè)。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響;另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,不適合進(jìn)行大量快速的測(cè)量;而且由于樣本經(jīng)過(guò)了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過(guò)程,對(duì)生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞,從而影響觀察的效果,無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量外泌體濃度。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。胸水外泌體PKH67

采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響。血漿血清外泌體提取試劑盒

Exosome,中文名外泌體,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸,能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣。2015年,隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出,越來(lái)越多的人開(kāi)始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療。外泌體作為一個(gè)新型的研究熱點(diǎn),由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式,在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。外泌體的提取的方式:超速離心法。血漿血清外泌體提取試劑盒

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