circZKSCAN1在肝ai細(xì)胞中低表達(dá)且抑制肝ai細(xì)胞的增殖，ciRS-7則被認(rèn)為是非小細(xì)胞肺ai、結(jié)腸ai和胃ai等中流的預(yù)后指標(biāo)，其高表達(dá)與較高的臨床分期和較差的總體生存期相關(guān)。目前已發(fā)現(xiàn)組織、血液和外泌體中的circRNA分子表達(dá)失調(diào)，而多種circRNA的聯(lián)合檢測會(huì)提高外泌體標(biāo)志物的敏感性和特異性，甚至可達(dá)到90％左右。外泌體可作為納米載體來介導(dǎo)細(xì)胞間的信息傳遞，發(fā)揮信息傳遞作用的方式主要有：在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移受體，通過配體受體介導(dǎo)的方式作用于受體細(xì)胞，向受體細(xì)胞轉(zhuǎn)移功能蛋白，通過膜融合方式向受體細(xì)胞傳遞mRNA、miRNAs或轉(zhuǎn)錄因子等信息。這些方式為中流靶向zhiliao開辟了新的途徑。外泌體在化療藥物的促轉(zhuǎn)移過程中具有重要的作用。超速離心法提取外泌體

外泌體(exosomes)是一類由細(xì)胞分泌到胞外的囊泡。與其他兩種胞外囊泡(微囊泡和凋亡小體)相比，外泌體在產(chǎn)生方式、尺寸、密度和內(nèi)容物等方面存在明顯差異。不同于微囊泡“出芽”的形成方式，外泌體主要通過胞吐過程釋放至細(xì)胞外:首先細(xì)胞膜向內(nèi)凹陷形成早期核內(nèi)體(earlyendosomes)，早期核內(nèi)體進(jìn)一步內(nèi)陷形成多泡體(multivesicularbodies，MVBs)，其中一部分多泡體與溶酶體(lysosome)融合，進(jìn)而降解;另一部分與細(xì)胞膜融合，將其內(nèi)部所包含的囊泡釋放至胞外，即為外泌體。外泌體具有獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，其直徑為30～200nm，密度為1.13～1.19g/mL，組成包括細(xì)胞來源相關(guān)的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、RNA、DNA等物質(zhì)，在其表面連接有大量的糖鏈，如甘露糖、聚乳糖胺和α2，6-唾液酸等。超速離心法提取外泌體干細(xì)胞外泌體對(duì)多種類型的免疫細(xì)胞均具有免疫調(diào)節(jié)作用。

外泌體的miRNA或蛋白質(zhì)等遺傳分子與肝臟病理息息相關(guān)，在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點(diǎn)或分子標(biāo)志物。對(duì)外泌體的研究，將有利于闡述肝臟及其疾病的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制，為尋求臨床可用的biomarkers和開發(fā)新的治理方法提供支持。外泌體可以通過轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和miRNAs進(jìn)行細(xì)胞間交流，從而作用于周圍的細(xì)胞并改變肝臟的微環(huán)境。細(xì)胞內(nèi)多泡體（MVBs）與細(xì)胞膜融合，釋放內(nèi)部的外泌體到細(xì)胞外，被其他細(xì)胞攝取，通過細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞作用釋放攜帶的內(nèi)含物，在受體細(xì)胞中調(diào)控生理活動(dòng)。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長、細(xì)胞遷移、抗病毒等生理過程。

外泌體起源于多泡體,以細(xì)胞管腔內(nèi)囊泡的形式存在.細(xì)胞的胞吞形成帶有外源性抗體的內(nèi)體小泡,在高爾基體等細(xì)胞器的作用下形成早期核內(nèi)體,早期核內(nèi)體的囊膜內(nèi)陷、突入形成多個(gè)小囊泡,并選擇性的接受細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等成分,較終形成晚期核內(nèi)體,晚期核內(nèi)體與細(xì)胞膜融合,并將外泌體排出胞外。這是一個(gè)連續(xù)而又復(fù)雜的過程,從內(nèi)體小泡到成熟外泌體,需要在各細(xì)胞器間傳遞并包裝,包括:TSG101、Alix蛋白、CD63、CD81、神經(jīng)酰胺、膽固醇等。外泌體的排出跟其他胞內(nèi)小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的調(diào)控,敲除細(xì)胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌體不能排出,且從高爾基體到晚期核內(nèi)體的囊泡運(yùn)輸不受影響?；顑?nèi)的外泌體動(dòng)態(tài)（哪個(gè)外泌體遷移至何處）也會(huì)成為今后需要努力研究的重要課題。

尺寸排除色譜法是使用聚合物凝膠或類似的固定相柱進(jìn)行外泌體分離的技術(shù),樣品以重力滴落的方式收集。流體力學(xué)半徑較小的樣品組分進(jìn)入凝膠孔隙后,需耗費(fèi)相對(duì)較長的時(shí)間通過凝膠柱,導(dǎo)致延遲洗脫,實(shí)現(xiàn)不同粒徑大小顆粒分離。尺寸排除色譜法可以與差速離心法結(jié)合而不會(huì)明顯損失外泌體,保證產(chǎn)量的同時(shí)可有效去除雜質(zhì)蛋白,更適合目標(biāo)蛋白質(zhì)組學(xué)和miRNA的分析。靜水過濾透析法主要利用靜水壓力迫使樣品中不同特定大小分子先后通過透析管,其中溶劑和小溶質(zhì)很容易通過透析管,而較大的顆粒,如外泌體和其他囊泡,仍留在透析管中而被收集。在免疫系統(tǒng)中，據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制。超速離心法提取外泌體

外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。超速離心法提取外泌體

利用蛋白質(zhì)免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)可以對(duì)外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)進(jìn)行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經(jīng)典表征手段之一，操作時(shí)往往需要細(xì)胞裂解液作為陰性對(duì)照。常用的外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白質(zhì)CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡誘導(dǎo)因子6相互作用蛋白(Alix)等，內(nèi)參蛋白質(zhì)可以是肌動(dòng)蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶，陰性對(duì)照蛋白可以是阻抑素(PHB，線粒體標(biāo)志蛋白)或鈣聯(lián)結(jié)蛋白Calnexin。在酶聯(lián)免疫吸附析法中，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質(zhì)，隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時(shí)長的問題，相比較而言，酶聯(lián)免疫吸附分析法比蛋白質(zhì)免疫印跡法更加快速，適用于高通量分析。超速離心法提取外泌體

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