Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻中介紹，通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進一步純化胎盤相關(guān)外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進行2次沉淀。經(jīng)過多次實驗反復(fù)驗證，確定同時表達外泌體標志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法。唾液外泌體iTRAQ

瘤釋放的外泌體可以通過削弱免疫效應(yīng)細胞的反應(yīng)和激發(fā)免疫抑制細胞的擴增，來營造一個免疫抑制的環(huán)境。瘤釋放的外泌體可以替代瘤細胞接受免疫系統(tǒng)的攻擊，從而幫助瘤細胞逃過免疫系統(tǒng)的識別。瘤釋放的外泌體可以引發(fā)炎癥，利用基質(zhì)浸潤細胞的反應(yīng)營造出利于瘤生長的微環(huán)境。研究表明，在過去短短的5年里，對外泌體的研究已經(jīng)取得了比較好的的進展。如今，收集并分析瘤釋放的外泌體已經(jīng)成為液體活檢的一個重要研發(fā)方向。靶向瘤釋放外泌體的治理策略將對改善病癥患者的命運發(fā)揮出舉足輕重的影響。遼寧外泌體circRNA測序類風濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細胞所釋放的外泌體。

外泌體即細胞分泌的直徑約40-100nm的微小膜泡，多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。一開始被當做細胞排泄物，但是近幾年，研究發(fā)現(xiàn)外泌體可謂是小身體大作用。種瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移后，如何靶向呈遞藥物一直是種瘤醫(yī)治中的一個巨大挑戰(zhàn)。發(fā)表于NanoLett的一項研究中，研究人員利用外泌體制備藥物的遞送系統(tǒng)（LD-MDS），并取得成功。在這項研究中，研究人員將相關(guān)藥物錨定在活巨噬細胞膜上，細胞自身相關(guān)蛋白酶響應(yīng)開啟并將藥物轉(zhuǎn)載進入外泌體，順利遞送至肺轉(zhuǎn)移灶并且轉(zhuǎn)化為納米囊泡和次級納米囊泡，促進轉(zhuǎn)移性4T1病細胞的有效內(nèi)化和細胞死亡。之后，受損的4T1病細胞可以釋放次級納米囊泡和游離藥物分子，再破壞鄰近的病細胞。研究顯示，LD-MDS對體內(nèi)直徑小于100μm的肺轉(zhuǎn)移病灶顯示出優(yōu)異的靶向效率，并顯著壓制肺轉(zhuǎn)移。

研究者利用電穿孔法對外泌體進行DOX的負載，進行體內(nèi)抗中流效果的研究。實驗結(jié)果顯示，負載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對中流的抑制效果遠優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX，其不僅水溶性低，而且容易使DOX與血液中的蛋白結(jié)合，從而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識別捕獲，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護DOX，可以提高DOX水溶性，避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉，提高靶向性，從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙，快速直達基底層起效。

雖然系統(tǒng)遞送的外泌體主要在肝臟、腎臟和脾臟中積累，但通過在外泌體的外表面上展示特定的靶向分子。例如，識別靶抗原的肽或抗體片段，可以獲得靶向外泌體；通過在細胞分泌囊泡上展示糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定的納米抗體，可以使細胞分泌囊泡顯示多種蛋白，包括抗體、熒光蛋白和信號分子。自然分泌的外泌體分離純化直接作為藥物的潛力有限，但是，將自然的外泌體分泌所需組分摻入合成脂質(zhì)體或納米顆粒中，并且使用可控程序組裝后的工程化外泌體模擬物在藥學上擁有更大的應(yīng)用潛力。外泌體提純方法中，超速離心法和聚合物沉淀法（市售試劑盒）混入多種雜質(zhì)。杭州外泌體NTA

隨著今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰，并擴大臨床應(yīng)用。唾液外泌體iTRAQ

與干細胞不同的是：干細胞外泌體對受損的微環(huán)境不響應(yīng)，但它可以通過改變細胞外基質(zhì)，改變受體細胞的轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組，來調(diào)節(jié)細胞凋亡，生長，增殖和分化途徑。因此，干細胞外泌體具有減少細胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)、促進血管生成、抑制纖維化、提高組織修復(fù)潛力等重要生物學功能，在調(diào)控組織再生方面存在良好的臨床應(yīng)用前景。干細胞外泌體的優(yōu)點，體積小：納米級粒子，大小約為細胞的1/200，因此能很好地被人體所利用。免疫反應(yīng)程度低：外泌體不是細胞，只作為載具，外膜的表層上呈現(xiàn)較少的抗原，免疫系統(tǒng)難識別，對人體影響小?？纱┩秆X障壁：體積小加上脂質(zhì)外膜的特性，使其可以通過血腦障壁，抵達腦部組織。唾液外泌體iTRAQ