雖然外泌體作為藥物載體具有生物兼容性、穩(wěn)定性和內在靶向性等潛在優(yōu)勢，但是外泌體在藥物遞送中的應用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：選擇何種細胞作為外泌體的供體：如DCs來源的外泌體可用于免疫治理，因其富含組織相容復合物（MHC）及T細胞共刺激分子，能在體內喚醒T淋巴細胞，進而抑制瘤細胞增殖；骨髓來源的間充質干細胞（MSCs）來源的外泌體對KRAS基因有抑制作用；γδT細胞、自然殺傷細胞（NK）、瘤細胞等均有研究報道可作為載藥級別外泌體的細胞來源。神經(jīng)細胞來源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關的分子。北京外泌體Dil

獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測量，但兩種方法也各有不足。動態(tài)光散射法中散射光強度依賴于顆粒質量(體積)，混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴重影響測量結果，因此動態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動態(tài)光散射法所得的結果強烈依賴于所應用的數(shù)學算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進行檢測時，為了得到準確的濃度和粒徑信息，需要根據(jù)所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準，操作繁瑣。受檢測靈敏度所限，納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm～1μm的顆粒，粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外，兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進行分析，難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質聚合體和生物囊泡。北京外泌體Dil外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標記。

外泌體(exosome)是多種活細胞經(jīng)過“內吞–融合–外排”等一系列過程主動向胞外分泌的直徑為30~150nm的雙層膜結構細胞外囊泡(extracellularvesicles,EVs),廣fan存在于血液、尿液和唾液等生物體液中,并通常作為細胞間胞質蛋白、核酸和脂質的轉移載體發(fā)揮運輸調控作用,被認為是細胞間通訊的核xin部分。外泌體于1983年在HARDING等和PAN等研究羊網(wǎng)織紅細胞分化的過程中被發(fā)現(xiàn),并于1996年由RAPOSO等證實能夠作為一種細胞間通訊結構在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用后得到了廣fan關注。近年來,隨著外泌體在中流、心血管和感ran性疾病等多種疾病形成中的生物學作用和功能被逐漸揭示,尤其是2015年MELO等發(fā)現(xiàn),外泌體Glypican-1蛋白可有效區(qū)分慢性胰腺炎與胰腺ai以來,外泌體作為疾病診斷、預后預測標志物以及藥物靶向zhiliao載體的轉化醫(yī)學應用也得到了迅速的推進。

外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個關鍵的檢查點：ILV的形成，阻止MVEs的降解以及MVEs和細胞膜的融合，這三個檢查點都包含在內體相關的囊泡運輸過程中。RABGTPase定位到特定膜結構的表面，通過招募效應因子來調節(jié)相應膜結構的囊泡運輸，例如，在內體溶酶體運輸網(wǎng)絡中，RAB5調節(jié)早期內體的形成及相互融合；內體膜上RAB5到RAB7的轉換調節(jié)早期向晚期內體的轉變；RAB7調節(jié)晚期內體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs；RAB27調節(jié)MVEs與細胞膜的對接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內吞的膜蛋白，特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長因子受體，定位到內體和MVEs，通過MVEs和溶酶體融合來進入溶酶體降解，此過程受多種RABGTPases和ESCRT復合體的調控。干細胞外泌體對多種類型的免疫細胞均具有免疫調節(jié)作用。

作用機制主要是旁分泌的間充質干細胞（MSC）被普遍地用于醫(yī)治各種人類疾病。已經(jīng)證明沒有一個因素足以調解MSC的醫(yī)治效果。然而，由許多細胞（包括MSC）分泌的外泌體膜囊泡是有吸引力的候選物作為其功效的載體。外泌體可以運輸和運送大量的蛋白質、脂質和核酸，并可以改變細胞和身體部位的功能。除了作為細胞間通訊的關鍵作用之外，外泌體越來越多地被認為是疾病的生物標志物和預后因子。此外，它們有潛力被用作臨床應用基因和藥物遞送的載體。該文回顧了外泌體的生物發(fā)生、分子組成及其作為細胞間通訊的信使的作用，著重于其作為干細胞醫(yī)治的載體的潛力。外泌體在體液中十分穩(wěn)定，同時外囊泡所含的蛋白質和RNA被外泌體的脂質雙層膜所包被也不會分解。血細胞提取試劑盒成分

因外泌體內含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質對相鄰細胞具有交換信息的功能。北京外泌體Dil

研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達外泌體公認的標志蛋白分子，同時也表達胎盤特異性蛋白分子，證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見，動態(tài)光散射分析粒徑，結果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻報道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經(jīng)過PKH67熒光染料染色后，與細胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進入細胞的活性，進一步驗證了我們應用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體，并從蛋白標志分子、電鏡、粒徑及分布、進入細胞活性四方面對其進行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎。北京外泌體Dil