在利用外泌體運(yùn)輸PTX進(jìn)行抗中流的研究中,由于間充質(zhì)干細(xì)胞可以歸巢(homing)至中流細(xì)胞微環(huán)境并且可以不通過(guò)基因操作即可對(duì)PTX運(yùn)輸,因此Pessina等采用間充質(zhì)干細(xì)胞SR4987作為分泌外泌體的母代細(xì)胞,而后將SR4987與PTX共混,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來(lái),研究其對(duì)體外人胰腺ai細(xì)胞株的影響。結(jié)果表明外泌體可以有效的運(yùn)載PTX并不破壞其功能,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047~0.095mg/mL之間時(shí)可以誘導(dǎo)中流細(xì)胞凋亡50%,這種抑制效果與純PTX對(duì)體外ai細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)。人體內(nèi)多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,包括干細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、及平滑肌細(xì)胞等。外泌體是如何產(chǎn)生的
外泌體(Exosome)是一種直徑為30-100nm的納米級(jí)脂質(zhì)包裹體結(jié)構(gòu),內(nèi)部包裹了蛋白、mRNA和microRNA等物質(zhì)。外泌體由細(xì)胞分泌釋放出來(lái),在血液等體液內(nèi)傳播,較后又可被其他細(xì)胞吞噬,是細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)。源自于間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)分泌的外泌體,富含一百多種胞外基質(zhì)蛋白,mRNA信使核糖核酸和多重生長(zhǎng)因子。在臨床上,干細(xì)胞外泌體主要治理燒傷、燙傷、皮膚潰瘍,再生健康皮膚;在護(hù)膚方面,主要是對(duì)外傷受損、衰老中毒皮膚進(jìn)行修復(fù),比較全的調(diào)理皮膚、改善膚質(zhì),令肌膚恢復(fù)年輕、健康的狀態(tài)。上海腦脊液外泌體以前無(wú)法用超速離心法提取的微囊泡,也通過(guò)運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。
外泌體特指直徑在30-150nm的囊泡,其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60,HSP70和HSP90),本示蹤病毒使用CD9作為生物標(biāo)記,通過(guò)將CD9與熒光蛋白偶聯(lián),帶熒光的膜蛋白會(huì)在表達(dá)至外泌體膜上,便于后續(xù)進(jìn)行、觀察內(nèi)化或其他實(shí)驗(yàn)。攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質(zhì)粒、細(xì)胞系的輔助下,經(jīng)過(guò)病毒包裝成為有g(shù)anran力的病毒顆粒,通過(guò)ganran細(xì)胞或組織,實(shí)現(xiàn)外源基因在細(xì)胞或組織中表達(dá)。
中流細(xì)胞分泌的外泌體可以通過(guò)體液進(jìn)入特定qi官,建立有利于ai細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境,包括促進(jìn)受體細(xì)胞上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、引發(fā)炎癥、促進(jìn)血管生成,為ai細(xì)胞的擴(kuò)散形成有利條件。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)中流細(xì)胞外泌體能夠引導(dǎo)ai癥轉(zhuǎn)移至特定qi官,在膜表面特異性整合素的作用下,中流細(xì)胞外泌體首先在特定的qi官累積,引起受體qi官產(chǎn)生炎癥、生成血管,形成有利于中流轉(zhuǎn)移的微環(huán)境,使得中流細(xì)胞更容易轉(zhuǎn)移至該qi官。Maji等揭示了惡性中流細(xì)胞外泌體中的AnnexinⅡ蛋白能夠促進(jìn)血管生成,為中流轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利的微環(huán)境。外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì)。
所有真核細(xì)胞類(lèi)型包括造血細(xì)胞、上皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和病癥細(xì)胞均可在培養(yǎng)條件下分泌外泌體。體內(nèi)所有體液,包括血液、唾液、腦脊液、腹水,甚至尿液中都可以分離得到外泌體。這些外泌體傳輸多種信號(hào)分子,包括蛋白質(zhì)、信使核糖核酸(mRNA)和非編碼核糖核酸(RNA),其攜帶的分子可以被其他細(xì)胞吸收。因此,外泌體可以將生物信息轉(zhuǎn)移到相鄰細(xì)胞。這種細(xì)胞間通信不只涉及生理功能,還涉及一些疾病的發(fā)病機(jī)理,包括瘤、心血管疾病和神經(jīng)退行性疾病等。外泌體被工程化改造后,具有靶向特定細(xì)胞類(lèi)型或組織的功能。研究所外泌體提取試劑盒分類(lèi)
抗體親和法和密度梯度離心法,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體。外泌體是如何產(chǎn)生的
外泌體(Exosome),是細(xì)胞外囊泡(EV)的一種主要類(lèi)型,是直徑為30至150nm的納米大小的膜結(jié)構(gòu),大多數(shù)細(xì)胞都會(huì)分泌外泌體。外泌體存在于各種生物體液中,通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)和代謝物等來(lái)發(fā)揮細(xì)胞間通訊功能,參與免疫應(yīng)答、代謝和心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病以及病癥進(jìn)展等多種生理和病理過(guò)程。在內(nèi)體轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒於嗄遗輧?nèi)體(MVE)的過(guò)程中,內(nèi)體膜向腔內(nèi)出芽形成腔內(nèi)囊泡(ILV),MVE與細(xì)胞膜融合釋放ILV到細(xì)胞外,即形成外泌體。外泌體是如何產(chǎn)生的