外泌體基礎醫(yī)學和臨床應用的探索和深入研究對如何準確及高純度提取外泌體,并完整保存提出了更高的技術要求。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質組分,并在100000×g~200000×g的轉速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術被認為是外泌體分離的“金標準”,也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過結合0.22μm或0.45μm孔徑濾膜進行超濾來提高產物純度減少外泌體的聚集,其分離效率容易受到加速度、轉子類型、旋轉半徑、沉降路徑長度以及樣品黏度等多種因素影響。在過去幾年中，有幾個實驗室報道了各種細胞類型的外泌體分泌，并討論了其潛在的生物學功能。唾液外泌體Dir

在當代準確醫(yī)療的大趨勢下，外泌體的發(fā)現和研究為肺病的早期診斷和醫(yī)治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現和早期診療提供可靠依據。根據種瘤來源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉移過程中的作用及相關機制的研究，臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定合適的醫(yī)治方案，以達到改善肺病患者生存率，延長肺病患者生存時間的目的。但是，針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決，如：外泌體的純化及標記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機制及信號通路等?？偠灾?，外泌體的研究有著廣闊的前景，基于外泌體與肺病的研究，有望研發(fā)出能夠應用于肺病臨床診斷和醫(yī)治的有效措施，造福更多的患者。廣州CD63外泌體慢病毒包裝超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法。

外泌體特指直徑在30-150nm的囊泡，其主要來源于細胞內多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9）、熱休克蛋白家族（HSP60,HSP70和HSP90），本示蹤病毒使用CD9作為生物標記，通過將CD9與熒光蛋白偶聯，帶熒光的膜蛋白會在表達至外泌體膜上，便于后續(xù)進行、觀察內化或其他實驗。攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質粒、細胞系的輔助下，經過病毒包裝成為有ganran力的病毒顆粒，通過ganran細胞或組織，實現外源基因在細胞或組織中表達。

外泌體開始被認為是細胞排出代謝廢物的一種方式，能夠幫助缺乏高效降解能力或位于排泄系統(tǒng)的細胞排出不必要的蛋白質和RNA。近年來，隨著人們對外泌體的深入了解，外泌體的多種生物功能先后被發(fā)現。如今外泌體作為一種細胞間交流、傳遞大量的生物功能分子的重要方式日益受到重視。外泌體與受體細胞的信息交流可能通過以下4種途徑實現:(1)外泌體表面膜蛋白質被目的細胞表面的受體識別，從而激huo靶細胞;(2)外泌體在蛋白酶作用下產生的表面膜蛋白質碎片可作為目的細胞表面受體的配體;(3)外泌體脂膜可以與目的細胞膜融合，將蛋白質和RNA等內容物釋放進去，此類膜融合可能改變靶細胞的一些膜特性，例如脂質和膜蛋白質的密度及種類;(4)目的細胞通過胞吞的形式攝入外泌體。外泌體是一種由活細胞分泌的，直徑約為40～160nm的具有雙層膜結構的生物活性囊泡。

外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙，快速直達基底層起效；富含100+多種胞外基質蛋白、胞外基質酶以及細胞黏附分子；能夠有效促進皮膚成纖維細胞（HDFs）中I型膠原蛋白、成纖維蛋白，促進皮膚有效快速再生（Rejuvenation）；能夠有效促進皮膚成纖維細胞（HDFs）彈性蛋白生成，保持皮膚飽滿和彈性；有效降低皮膚成纖維細胞（HDFs）中膠原蛋白酶(MMP-1)的生成從而防止皮膚間質中IIIIII型膠原蛋白被降解；富含活性物質能夠促進皮膚有些血管的修復與重建再生。PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上。血漿提取試劑盒方法

臨床前研究的證據表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復的潛在無細胞治理劑。唾液外泌體Dir

目前市面上開發(fā)的外泌體提取試劑盒，是根據外泌體表面由類似于細胞膜的脂質雙分子層具有一定疏水性這一特性，用試劑捆綁水分子，從而可通過常規(guī)離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少、對設備要求低，但與差速離心方法類似，其分離得到的沉淀包含其他細胞分泌的囊泡，且血清中含有大量血清蛋白分子，成分復雜，很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質。Sabapatha等曾根據來源于胎盤的外泌體表面特異表達這一特性，使用耦合到磁珠的抗抗體，采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少，不適用于大規(guī)模提取制備，且免疫磁珠價格昂貴，不利于提取技術的普及。唾液外泌體Dir