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為獲得外泌體的大小、濃度、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息,可以通過(guò)電鏡、動(dòng)態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀、蛋白質(zhì)免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細(xì)胞儀等對(duì)外泌體進(jìn)行表征。通過(guò)電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息,不同類(lèi)型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同,得到的外泌體形態(tài)存在差異。例如,在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中,外泌體呈現(xiàn)囊泡獨(dú)有的茶托形,可能由于樣品在固定或染色過(guò)程中極度脫水,導(dǎo)致外泌體塌陷所致。與之相反,在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形,由于不會(huì)脫水變性,所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實(shí)狀態(tài)。另外,由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率,也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度、粒徑分布等信息。外泌體作為核酸分子的藥物載體主要用于基因治理。北京外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F(xiàn)在外泌體特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。體液提取試劑盒生產(chǎn)廠家干細(xì)胞外泌體可以有效活化提高細(xì)胞能量加速細(xì)胞排毒、淡化色斑。
外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達(dá)基底層起效;富含100+多種胞外基質(zhì)蛋白、胞外基質(zhì)酶以及細(xì)胞黏附分子;能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)中I型膠原蛋白、成纖維蛋白,促進(jìn)皮膚有效快速再生(Rejuvenation);能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)彈性蛋白生成,保持皮膚飽滿和彈性;有效降低皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)中膠原蛋白酶(MMP-1)的生成從而防止皮膚間質(zhì)中IIIIII型膠原蛋白被降解;富含活性物質(zhì)能夠促進(jìn)皮膚有些血管的修復(fù)與重建再生。
在運(yùn)輸DOX的研究中,Wei等選擇了已經(jīng)在臨床上使用的未成熟的樹(shù)突細(xì)胞作為母代細(xì)胞,通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b,這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結(jié)合,使外泌體對(duì)DOX的運(yùn)輸具有靶向性。將對(duì)iRGD肽靶向的外泌體和未經(jīng)靶向性處理的外泌體用DiR染料標(biāo)記,并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細(xì)胞的小鼠體內(nèi),觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經(jīng)出現(xiàn)在中流組織處,在注射2h后外泌體的含量高,而未經(jīng)靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟,幾乎很少到達(dá)中流組織處,說(shuō)明對(duì)iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。
外泌體作為疾病診斷的標(biāo)志物具有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì):(1)與正常細(xì)胞相比,病變細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體在分泌量和內(nèi)容物方面存在明顯差異。病變的細(xì)胞和組織能夠產(chǎn)生更多外泌體。(2)由于特殊的生成方式,外泌體的組成不同于來(lái)源細(xì)胞。其內(nèi)包含的一些特異性蛋白質(zhì)能夠揭示外泌體的起源、結(jié)構(gòu)和運(yùn)輸方式,有利于深入了解外泌體的產(chǎn)生機(jī)制。(3)病變細(xì)胞分泌的外泌體通過(guò)胞吐的過(guò)程進(jìn)入血液、尿液等體液,囊泡狀結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)外泌體內(nèi)部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干擾,有利于保持其結(jié)構(gòu)完整和生物活性,通過(guò)對(duì)此類(lèi)體液進(jìn)行分析可以實(shí)現(xiàn)疾病的無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)檢測(cè)。外泌體在體液中十分穩(wěn)定,同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。北京外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)
外泌體不只可作為疾病診斷的生物標(biāo)志,而且可作為天然的藥物傳遞載體。北京外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)
外泌體特指直徑在30-150nm的囊泡,其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60,HSP70和HSP90),本示蹤病毒使用CD63作為生物標(biāo)記,通過(guò)將CD63與熒光蛋白偶聯(lián),帶熒光的膜蛋白會(huì)在表達(dá)至外泌體膜上,便于后續(xù)進(jìn)行、觀察內(nèi)化或其他實(shí)驗(yàn)。慢病毒載體的構(gòu)建原理就是將HIV21基因組中的順式作用元件(如包裝信號(hào)、長(zhǎng)末端重復(fù)序列)和編碼反式作用蛋白的序列進(jìn)行分離。北京外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)