近年來(lái),隨著玻璃化冷凍技術(shù)的不斷發(fā)展,成熟卵母細(xì)胞紡錘體的冷凍保存研究取得了進(jìn)展。研究表明,采用玻璃化冷凍法冷凍保存的成熟卵母細(xì)胞,在解凍后其紡錘體和染色體的形態(tài)及功能均能得到較好的保持。這主要得益于玻璃化冷凍過(guò)程中避免了冰晶形成對(duì)細(xì)胞的損傷,以及冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的有效保護(hù)。然而,值得注意的是,盡管玻璃化冷凍法在提高解凍存活率和妊娠成功率方面取得了成效,但仍存在一些問(wèn)題。例如,冷凍過(guò)程中紡錘體的微管結(jié)構(gòu)可能受到低溫的影響而發(fā)生解聚,導(dǎo)致染色體分離異常。此外,冷凍保護(hù)劑的毒性也可能對(duì)卵母細(xì)胞造成一定的損傷。為了克服這些問(wèn)題,研究者們進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)和優(yōu)化工作。例如,通過(guò)改進(jìn)冷凍保護(hù)劑的配方和濃度,降低其對(duì)細(xì)胞的毒性;通過(guò)優(yōu)化冷凍速率和程序,減少冷凍過(guò)程中對(duì)細(xì)胞的機(jī)械損傷;以及通過(guò)篩選和評(píng)估不同冷凍載體和保存時(shí)間對(duì)卵母細(xì)胞冷凍效果的影響,尋找好的冷凍保存條件。紡錘體在減數(shù)分裂中也發(fā)揮重要作用,確保生殖細(xì)胞染色體正確分離。雙折射性紡錘體玻璃底培養(yǎng)皿
紡錘體的完整性決定了染色體分裂的正確性。在有絲分裂前期,中心體被復(fù)制形成兩個(gè)中心體,并逐漸分離,形成兩個(gè)紡錘體。紡錘體的微管從中心體發(fā)出,與染色體上的著絲粒(kinetochore)結(jié)合。著絲粒是一組復(fù)雜的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),可以與微管的末端結(jié)合。當(dāng)纖維束的微管末端與著絲粒結(jié)合時(shí),纖維束開(kāi)始縮短,將染色體拉向兩端,實(shí)現(xiàn)染色體的精確分離。這一過(guò)程不僅確保了每個(gè)新細(xì)胞都能獲得正確數(shù)量的染色體,還保證了遺傳信息的穩(wěn)定傳遞。美國(guó)成熟卵母細(xì)胞紡錘體胚胎植入紡錘體在細(xì)胞分裂后期推動(dòng)染色體向細(xì)胞兩極移動(dòng)。
紡錘體觀測(cè)儀在補(bǔ)救ICSI中的應(yīng)用
我們知道,成熟的卵母細(xì)胞排出***極體。IVF加入精子后,精子會(huì)穿透層層障礙**終進(jìn)入卵子,隨著時(shí)間的推移,卵子的紡錘體會(huì)將染色單體拉向兩極,進(jìn)而排出第二極體,再往后大約加精后9-16小時(shí),雌雄原核會(huì)出現(xiàn),而原核的出現(xiàn)才是受精的標(biāo)志。但是對(duì)于那些沒(méi)有受精的卵子,到了原核出現(xiàn)的時(shí)間窗,發(fā)現(xiàn)沒(méi)有受精時(shí)再去補(bǔ)救ICSI,往往錯(cuò)過(guò)了卵子的比較好受精時(shí)間,因?yàn)闆](méi)有受精的卵子會(huì)在體外老化,即使受精,胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以,我們?cè)诩泳蟮?-6小時(shí),通過(guò)觀察第二極體的排出來(lái)初步判斷是否受精,**的增加了那些受精障礙患者的受精率,也避免了卵子的老化。
當(dāng)然,偶爾也會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤補(bǔ)救。文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)IVF受精后的未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI補(bǔ)救,實(shí)驗(yàn)組用紡錘體觀測(cè)儀觀察并統(tǒng)計(jì)紡錘體的數(shù)目,82.7%含有一個(gè)紡錘體,17.3%含有兩個(gè)紡錘體,并對(duì)含有一個(gè)紡錘體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI;而對(duì)照組并未用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體,只對(duì)未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI。結(jié)果發(fā)現(xiàn),使用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率,降低多原核受精比率。
紡錘體觀測(cè)新技術(shù)提升“試管嬰兒”胚胎受精率
什么是紡錘體觀測(cè)儀?
紡錘體觀測(cè)儀是利用光線經(jīng)過(guò)雙折射性的物體時(shí)產(chǎn)生的光程差,對(duì)卵母細(xì)胞內(nèi)的紡錘體進(jìn)行動(dòng)態(tài)及無(wú)創(chuàng)觀察的顯微觀測(cè)系統(tǒng)。
紡錘體觀測(cè)儀主要有什么用處?
紡錘體觀測(cè)儀主要用于ICSI注射時(shí)紡錘**置觀測(cè),避免ICSI注射時(shí)對(duì)卵子的紡錘體損傷。
目前的ICSI注射方法是:假定成熟的MII卵母細(xì)胞的紡錘體靠近***極體,通過(guò)定位***極**置于6點(diǎn)或12點(diǎn)方向,在垂直于***極體的3點(diǎn)鐘方向注入精子。但事實(shí)上,紡錘體的位置不是固定不變的,***極體不能精細(xì)預(yù)測(cè)所有卵母細(xì)胞紡錘體的位置,約39%的紡錘體并不能通過(guò)***極體預(yù)測(cè)。傳統(tǒng)的ICSI注射很可能損壞紡錘體,若紡錘體損傷很可能導(dǎo)致卵母細(xì)胞死亡或染色體異常。因此,在ICSI注射時(shí)對(duì)紡錘體進(jìn)行觀察,對(duì)于ICSI操作和受精結(jié)局都有非常重要的意義,可以顯著提高ICSI受精率,有大量文獻(xiàn)報(bào)道正常受精率在觀察到紡錘體的卵子中***高于未觀察到紡錘體的卵子(83.3% VS 77.2%)。
紡錘體儀還有什么作用?
紡錘體觀測(cè)儀還可以對(duì)一代受精后的卵母細(xì)胞受精情況進(jìn)行評(píng)估,選擇未受精的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI***。 紡錘體在細(xì)胞分裂后期通過(guò)微管切割機(jī)制實(shí)現(xiàn)染色體分離。
在生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,卵母細(xì)胞冷凍保存技術(shù)作為輔助生殖技術(shù)的重要組成部分,近年來(lái)取得了進(jìn)展。尤其是針對(duì)成熟卵母細(xì)胞紡錘體的冷凍保存研究,不僅關(guān)乎女性生育能力的保存,還涉及到遺傳學(xué)的穩(wěn)定性和安全性。成熟卵母細(xì)胞,即處于第二次減數(shù)分裂中期(MII期)的卵母細(xì)胞,其內(nèi)部包含一個(gè)高度復(fù)雜且精細(xì)的紡錘體結(jié)構(gòu)。紡錘體由微管組成,這些微管通過(guò)動(dòng)態(tài)變化,將染色體緊密地聯(lián)系在一起,并確保在細(xì)胞分裂過(guò)程中染色體的正確分離。成熟卵母細(xì)胞的紡錘體對(duì)溫度變化和機(jī)械刺激極為敏感,這使得其冷凍保存過(guò)程充滿了挑戰(zhàn)。紡錘體的功能異??赡軐?dǎo)致細(xì)胞分裂錯(cuò)誤,引發(fā)遺傳疾病。香港紡錘體實(shí)時(shí)成像紡錘體胚胎植入
紡錘體的形成與細(xì)胞骨架的重構(gòu)密切相關(guān)。雙折射性紡錘體玻璃底培養(yǎng)皿
核移植,又稱體細(xì)胞核移植,是一種將體細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核卵母細(xì)胞中的技術(shù)。這一技術(shù)的關(guān)鍵在于確保移植后的細(xì)胞核能夠在卵母細(xì)胞內(nèi)重新編程,恢復(fù)全能性,并引導(dǎo)后續(xù)的胚胎發(fā)育。自1996年克隆羊“多莉”誕生以來(lái),核移植技術(shù)便引起了全球范圍內(nèi)的關(guān)注與研究熱潮。紡錘體是卵母細(xì)胞在減數(shù)分裂過(guò)程中形成的關(guān)鍵結(jié)構(gòu),負(fù)責(zé)精確分離染色體,確保遺傳信息的正確傳遞。然而,紡錘體對(duì)外部環(huán)境極為敏感,容易受到冷凍過(guò)程中溫度波動(dòng)、滲透壓變化及冷凍保護(hù)劑毒性等因素的影響而發(fā)生損傷。因此,紡錘體卵冷凍技術(shù)的成功與否,直接關(guān)系到核移植后胚胎的發(fā)育潛力和質(zhì)量。雙折射性紡錘體玻璃底培養(yǎng)皿
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