基因和RNAi***在臨床上的應用需要安全高效的載體。迄今為止，核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關的安全問題有很多:誘導免疫反應的風險、不必要的突變和**。因此，在開發(fā)基于脂質或聚合載體的非病毒載體是勢在必行的。1965年，Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖，這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年，F(xiàn)elgner引入了DOTMA，這是第一種用于DNA轉染的陽離子脂質。從那時起，大量不同的脂質和聚合物被開發(fā)出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術，開發(fā)出了Gemate系列轉染試劑。作為一般指導原則，建議使用早期傳代的細胞以獲得良好的轉染效率，特別是涉及原代或干細胞的轉染。浙江轉染試劑現(xiàn)貨

在腺病毒載體或脂質體的全身遞送后，轉基因表達相對短暫。靜脈注射脂叢的肺表達比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機制可能有以下幾種:(a)產生針對外源基因產物的新***抗體，(b)細胞因子介導的啟動子關閉，(c)通過凋亡、先天或適應性免疫反應根除表達細胞以及（d）表達基因的細胞因細胞凋亡而減少是導致表達減少。這些機制具有重要意義，因為不可能重復給藥，而且轉基因凈表達會隨著時間的推移而減少。盡管通過中和或消除細胞因子的產生可以提高肺中的基因表達水平。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉氨酶水平的增加，在相同劑量下，小鼠肝臟出現(xiàn)組織病理學病變，但肺部沒有不良反應。這種增加可以通過使用較少的細胞毒性陽離子脂質體（CLs）來控制。轉氨酶的釋放歸因于未甲基化的堿基，如pDNA序列中的胞嘧啶和鳥嘌呤。寧夏DOTAP 轉染試劑化學轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。

PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質)制成的，是***個用作基因載體的聚酯。在生理環(huán)境中，PHP可以在不到兩個小時的時間內失去其初始分子量的50%。然而，PHP完全分解為其等效單體需要三個月的時間，分解產物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨存在時降解很快，但與DNA絡合時更穩(wěn)定。將PHP酯/pSV-gal復合物轉染CPAE細胞，測定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉運聚合物，PHP酯的轉染效率與聚L-賴氨酸相當。轉染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉染細胞的能力不受FBS存在的影響。結果表明，PHP酯是一種潛在的基因載體。

基于病毒的轉染，或者更具體地稱為轉導，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。逆轉錄病毒，如慢病毒，通常用于穩(wěn)定轉染。相比之下，腺病毒、腺相關病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩(wěn)定轉染的病毒載體。與非病毒轉染相比，病毒轉導被***認為是一種轉染難以轉染的細胞(如原代細胞)的高效方法。一般來說，逆轉錄病毒只能用于轉染分裂細胞，而腺病毒、AAV和皰疹病毒可用于轉染分裂細胞和非分裂細胞。然而，病毒轉導與較高的細胞毒性相關，并可能造成病毒***的風險。病毒載體通常包含一個病毒包膜，它包圍并保護病毒。表面蛋白可能存在于某些類型的病毒(如腺病毒)的表面，以促進與宿主細胞的接觸和通信。病毒遺傳物質被包裹在衣殼中，進入宿主細胞后，衣殼將被打開。與腺病毒、aav和皰疹病毒的基因組不同，這些病毒的基因組是單獨維持的，逆轉錄病毒基因組被整合到宿主基因組中。通常，腺病毒和皰疹病毒攜帶雙鏈DNA, AAV攜帶單鏈DNA，而逆轉錄病毒攜帶RNA。脂質復合物(CLNACs)通過網格蛋白參與的內吞作用進入細胞。

脂質復合物(CLNACs)通過網格蛋白參與的內吞作用進入細胞，并被困在核內小體中，從這些囊泡結構中釋放出來，進入核周區(qū)域，***進入細胞核。內吞作用在一定程度上取決于脂質體載體的物理化學性質。Friend和同事描述了可能由脂質體與核膜融合而形成的囊泡和網狀核內膜。**近有研究表明，很大一部分從核內體釋放到細胞質質的質粒由于與細胞質中的大離子凝聚劑結合而失去活性。這可能解釋了脂質轉染所觀察到的低且可變的轉染率。雖然這些脂質載體從細胞外部到細胞核的路徑尚未完全確定，但核酸能夠產生其效果本身就是一項驚人的壯舉。至少對于質粒而言，較小的結構體比較大的質粒具有更高的轉染率。核酸外排，雖然不是常見的報道，但也被證明會發(fā)生。隨著寡核苷酸生物合成產業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉染的效率。浙江天津轉染試劑

為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。浙江轉染試劑現(xiàn)貨

在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。通常，質粒轉染和寡核苷酸轉染實驗都需要陽性對照、陰性對照、未轉染對照和模擬轉染對照。陽性對照是先前已被證明對轉染實驗產生已知影響的DNA或RNA，例如影響特定下游遺傳靶點的表達。在轉染工作的初始階段，需要一個陽性對照來建立一個優(yōu)化的轉染方案，之后，陽性對照可以作為參考，與實驗組進行比較。另一方面，陰性對照用于確認宿主細胞中預期的基因表達變化是否歸因于轉染而不是其他原因。在質粒DNA轉染中，陰性對照可以是缺乏DNA和轉染載體的反應，或者兩者都沒有，只有宿主細胞。在小RNA轉染中，陰性對照包含一個非同源序列，該序列通常是一個與靶序列具有相同核苷酸長度和組成但與任何已知哺乳動物基因不同源的打亂序列。未轉染的對照包括不含轉染試劑和核酸的細胞培養(yǎng)，作為宿主細胞基本信息的對照，包括活力、表型，更重要的是，不受轉染影響的靶基因的基線表達水平。模擬轉染是指不含遺傳靶標或核酸的轉染，可以評估轉染試劑(如背景自熒光噪聲)產生的影響。在質粒轉染實驗中，推薦使用空質粒對照作為模擬轉染對照。浙江轉染試劑現(xiàn)貨