Cy5:激發(fā)波長633/635nm，比較大發(fā)射波長670nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測;3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù)，熒光強(qiáng)度低于APC。5)與單核和粒細(xì)胞非特異性結(jié)合多，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

5、PE:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長575nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測;3)其熒光泯滅性強(qiáng)，不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)，但適用于激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。

6、PE-TR:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長615nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測;2)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。

7、PE-AlexaFluor610:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長628nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測;2)熒光強(qiáng)度高;3)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。 D-熒光素鉀鹽南京星葉生物科技有限公司。甘肅熒光染料熒光素酶

1.DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備（1）配置DMSO或EtOH儲存液：儲存液用DMSO或EtOH配置濃度1～5mM。注意：未使用的儲存液保存在-20°C，避免反復(fù)凍融。（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5μM的工作液。注意：工作液的**終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來配制?？梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找比較好條件。

2.懸浮細(xì)胞染色（1）懸浮細(xì)胞密度為1×106/mL加入到工作液中。（2）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時間不同。（3）染色細(xì)胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。（4）傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。（5）重復(fù)（3），（4）步驟兩次以上。 廣州熒光染料細(xì)胞膜CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。

3.粘壁細(xì)胞的染色（1）使粘壁的細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。（4）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時間不同。（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式細(xì)胞儀的檢測DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。

如何選擇的染料？

考慮到熒光染料種類繁多，您如何為您的特定應(yīng)用選擇使用哪種染料？以下是您需要考慮的一些因素?！c實(shí)驗(yàn)設(shè)計的兼容性：雖然它們可能與其他熒光團(tuán)共享一些光譜相似性，但每種染料都是***的，并且具有不同的功能、激發(fā)和發(fā)射波長、波段形狀和寬度以及光穩(wěn)定性。為確保成功，請選擇與您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計相輔相成的一種。與設(shè)備的兼容性：選擇與您正在使用的照明源相匹配的染料。在選擇合適的熒光儀器時，請考慮儀器的靈敏度、動態(tài)范圍、穩(wěn)定性和通量、信噪比和信空白比。為了獲得更好的結(jié)果，請確保染料的發(fā)射曲線與可用的檢測方法相匹配。與樣品中其他熒光材料的相容性：在雙重或三重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中，您選擇的染料的發(fā)射和激發(fā)曲線不應(yīng)與其他熒光團(tuán)重疊。由于許多天然存在的細(xì)胞成分會以與您選擇的染料或探針相同的波長發(fā)出熒光，因此您還需要確?？梢詮谋尘白园l(fā)熒光中清楚地識別所選染料產(chǎn)生的信號。 DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）對活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。

在1990年代***使用的綠色熒光蛋白（從水母維多利亞水母克隆）及其衍生物（例如藻紅藍(lán)蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等）是當(dāng)今生物學(xué)研究中**常用的一些生物熒光團(tuán)。雖然熒光團(tuán)可用于在細(xì)胞、細(xì)菌和各種***中表達(dá)質(zhì)粒，但它們的使用有一些缺點(diǎn)，即它可能很耗時，并且在融合時還能夠改變某些細(xì)胞蛋白的正常生物學(xué)功能。此外，與許多其他熒光團(tuán)相比，生物熒光團(tuán)的光穩(wěn)定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當(dāng)下流行的生物熒光團(tuán)之一，由238個氨基酸組成，其中三個負(fù)責(zé)發(fā)出可見綠色熒光的結(jié)構(gòu)。在水母本身中，熒光團(tuán)與水母發(fā)光蛋白（一種蛋白質(zhì)）相互作用，當(dāng)添加鈣時會發(fā)出藍(lán)光。通過DNA重組，研究人員可以使用負(fù)責(zé)產(chǎn)生蛋白質(zhì)的基因來研究給定的基因和蛋白質(zhì)。在這里，在將復(fù)合物插入細(xì)胞之前，該基因與另一個基因（負(fù)責(zé)產(chǎn)生所需蛋白質(zhì)的第二個基因）結(jié)合。如果細(xì)胞產(chǎn)生綠色熒光，研究人員就可以明顯看出該細(xì)胞能夠表達(dá)目標(biāo)基因。GFP由488nm激光線激發(fā)，可在510nm處檢測。來自熒光團(tuán)的微弱信號可以使用抗GFP抗體放大。作為生物標(biāo)記物，綠色熒光蛋白用于以下功能：監(jiān)測各種生理過程*識別蛋白質(zhì)定位*檢測轉(zhuǎn)基因表達(dá)Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。甘肅熒光染料熒光素酶

異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機(jī)熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。甘肅熒光染料熒光素酶

一：染色液制備1、配制儲液：儲液用無水DMSO或無水EtOH配制，濃度1~5mM。注：未使用的儲液建議分裝后儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融。2、工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲液，配制濃度為1~5μM的工作液。注：工作液**終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始比較好濃度的摸索。二：懸浮細(xì)胞染色1、加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。2、37℃孵育細(xì)胞2~20min，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。3、孵育結(jié)束，1000~1500rpm離心5min。傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。4、重復(fù)步驟3兩次以上。甘肅熒光染料熒光素酶