細(xì)胞培養(yǎng)后，需要對(duì)其生長(zhǎng)情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察。由于細(xì)胞小而復(fù)雜，若不借助適當(dāng)?shù)氖侄危y以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)，更難發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細(xì)胞的技術(shù)，從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細(xì)胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細(xì)胞染色是研究細(xì)胞生物學(xué)特征的一種常用手段，然而，對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)新手來(lái)說(shuō)，想要獲得一張漂亮的細(xì)胞染色圖并不容易。染色試劑不會(huì)選、細(xì)胞染色不均勻、染色時(shí)切片脫落等都是很常見(jiàn)的問(wèn)題。

細(xì)胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見(jiàn)的細(xì)胞膜染料（見(jiàn)表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無(wú)明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干祖細(xì)胞等。 DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。廣東武漢熒光染料

Hoechst33342是一種可透過(guò)細(xì)胞膜并對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。Hoechst33342常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為350nm和460nm。可溶于水。4.染色程序：（1）用PBS或合適的緩沖液制備10～50μMHoechst33342染料。（2）將1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Hoechst染料溶液加入細(xì)胞培養(yǎng)物中（可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖液代替培養(yǎng)基）。（3）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘。（4）用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。（5）用帶有350nm激發(fā)波長(zhǎng)，460nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。細(xì)胞熒光染料Fluor 488PI是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。

羰花青染料***用作Di來(lái)標(biāo)記細(xì)胞、細(xì)胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。長(zhǎng)鏈羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于標(biāo)記膜和其他疏水結(jié)構(gòu)。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它們?cè)谥|(zhì)環(huán)境中具有極高的消光系數(shù)、環(huán)境依賴性熒光和短的激發(fā)態(tài)壽命。它們?cè)谑覝叵率怯蜖钗铮谒邪l(fā)出微弱熒光，但當(dāng)摻入膜中或與親脂性生物分子結(jié)合時(shí)，它們發(fā)出高熒光且相當(dāng)耐光。這些光學(xué)特性使它們成為細(xì)胞質(zhì)膜染色的理想選擇。一旦應(yīng)用于細(xì)胞，這些染料就會(huì)在質(zhì)膜內(nèi)橫向擴(kuò)散，導(dǎo)致整個(gè)細(xì)胞染色[1]。DiO、DiI、DiD和DiR呈現(xiàn)出不同的綠色、橙色、紅色和紅外熒光，從而促進(jìn)活細(xì)胞的多色成像和流式細(xì)胞術(shù)分析。DiO和DiI可分別與標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC過(guò)濾器一起使用。其中DiI及其類似物是**常用的，因?yàn)樗鼈兺ǔ１憩F(xiàn)出非常低的細(xì)胞毒性。此外，DiI***用于測(cè)定LDL和HDL等脂蛋白。親脂性氨基苯乙烯基染料DiA也常用于神經(jīng)元示蹤[2]。

3.粘壁細(xì)胞的染色（1）使粘壁的細(xì)胞在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。（4）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同。（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測(cè)（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見(jiàn)表1。（2）多色染料的同時(shí)檢測(cè)，濾光器按照以下設(shè)定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式細(xì)胞儀的檢測(cè)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè)。 脂溶性熒光染料cy3、cy5、cy7等。

羅丹明屬于呫噸族。與市場(chǎng)上的許多其他染料相比，羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們?cè)诰酆衔锛{米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測(cè)、活細(xì)胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作：分子開(kāi)關(guān)，病毒表面修飾，化學(xué)傳感器，硫醇。不同類型的染料通過(guò)它們各自的取代基（R1、R2、R3、R4和G）來(lái)區(qū)分。由于它們的差異，這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性（例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值）。氨基被剛性化的羅丹明染料無(wú)論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率，而在每個(gè)氮處具有兩個(gè)烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)部轉(zhuǎn)化，量子產(chǎn)率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點(diǎn)：--羧基傾向于在酸性溶液中質(zhì)子化--染料轉(zhuǎn)化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機(jī)溶劑中變?yōu)闊o(wú)色內(nèi)酯要將羅丹明用作熒光探針，必須對(duì)其進(jìn)行修改。這可以通過(guò)(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團(tuán)的修飾來(lái)實(shí)現(xiàn)。與TRITC一樣，羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm（比較大吸收波長(zhǎng)）和576nm（比較大發(fā)射）。吲哚菁綠（Indocyanine Green，簡(jiǎn)稱ICG）是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。石家莊熒光染料DIO

D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。廣東武漢熒光染料

CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫(xiě)，是由奇數(shù)個(gè)甲基單元連接的兩個(gè)氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長(zhǎng)長(zhǎng)、吸收和發(fā)射可調(diào)、消光系數(shù)高的特點(diǎn)CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標(biāo)記，對(duì)于蛋白抗體的標(biāo)記，可以通過(guò)簡(jiǎn)單的混合反應(yīng)來(lái)完成結(jié)合，下面我們介紹了蛋白抗體標(biāo)記的標(biāo)記方法，具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標(biāo)記效果，請(qǐng)制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0，應(yīng)使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL，標(biāo)記效率會(huì)**降低。為獲得比較好標(biāo)記效率，建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中，和銨離子，否則會(huì)影響標(biāo)記效率。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無(wú)水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制備成10mM儲(chǔ)備液。通過(guò)移液器或渦旋混合均勻計(jì)算。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個(gè)可進(jìn)行后續(xù)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。廣東武漢熒光染料