Cy5:激發(fā)波長633/635nm，比較大發(fā)射波長670nm。1)其標記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL4通道檢測;3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細胞術(shù)，熒光強度低于APC。5)與單核和粒細胞非特異性結(jié)合多，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

5、PE:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長575nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細胞儀:2)在流式細胞儀的FL2通道檢測;3)其熒光泯滅性強，不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)，但適用于激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。

6、PE-TR:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長615nm。1)在BeckmanCoulter流式細胞儀的FL3通道檢測;2)可適用于小功率激光器的流式細胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細胞儀。

7、PE-AlexaFluor610:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長628nm。1)在BeckmanCoulter流式細胞儀的FL3通道檢測;2)熒光強度高;3)可適用于小功率激光器的流式細胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細胞儀。 吲哚菁綠（Indocyanine Green，簡稱ICG）是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。外泌體熒光染料熒光素鉀鹽

如何選擇的染料？

考慮到熒光染料種類繁多，您如何為您的特定應(yīng)用選擇使用哪種染料？以下是您需要考慮的一些因素?！c實驗設(shè)計的兼容性：雖然它們可能與其他熒光團共享一些光譜相似性，但每種染料都是***的，并且具有不同的功能、激發(fā)和發(fā)射波長、波段形狀和寬度以及光穩(wěn)定性。為確保成功，請選擇與您的實驗設(shè)計相輔相成的一種。與設(shè)備的兼容性：選擇與您正在使用的照明源相匹配的染料。在選擇合適的熒光儀器時，請考慮儀器的靈敏度、動態(tài)范圍、穩(wěn)定性和通量、信噪比和信空白比。為了獲得更好的結(jié)果，請確保染料的發(fā)射曲線與可用的檢測方法相匹配。與樣品中其他熒光材料的相容性：在雙重或三重標記實驗中，您選擇的染料的發(fā)射和激發(fā)曲線不應(yīng)與其他熒光團重疊。由于許多天然存在的細胞成分會以與您選擇的染料或探針相同的波長發(fā)出熒光，因此您還需要確?？梢詮谋尘白园l(fā)熒光中清楚地識別所選染料產(chǎn)生的信號。 福建熒光染料熒光素鉀鹽熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。

小動物***成像技術(shù)（invivoimagingtechnology）是利用高靈敏度的光學(xué)檢測儀器直接檢測動物***體內(nèi)的細胞活動和基因行為研究的一類技術(shù)，是近年來發(fā)展**快的生命科學(xué)研究方法，是**直接觀察細胞和分子在體內(nèi)行為的新興技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個領(lǐng)域[1]。***動物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在***內(nèi)表達產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。而熒光發(fā)光成像技術(shù)是將熒光物質(zhì)或熒光物質(zhì)標記的小分子物質(zhì)如基因、細胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導(dǎo)入到***體內(nèi)，通過小動物***成像系統(tǒng)的激發(fā)光源激發(fā)熒光集團到達高能量狀態(tài)，而后產(chǎn)生波長較激發(fā)光長的發(fā)射光，然后通過高靈敏度制冷CCD鏡頭探測到***內(nèi)的發(fā)射光。通過***成像技術(shù)可以觀測***動物體內(nèi)**的生長和轉(zhuǎn)移、炎癥的發(fā)生、特定基因的表達和藥物作用效果等生物學(xué)過程。

Hoechst33342是一種可透過細胞膜并對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強烈的藍色熒光。Hoechst33342常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別為350nm和460nm?？扇苡谒?。4.染色程序：（1）用PBS或合適的緩沖液制備10～50μMHoechst33342染料。（2）將1/10細胞培養(yǎng)基體積的Hoechst染料溶液加入細胞培養(yǎng)物中（可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖液代替培養(yǎng)基）。（3）在37℃培養(yǎng)細胞10～20分鐘。（4）用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。（5）用帶有350nm激發(fā)波長，460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在體內(nèi)表達產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。

SuperFluor活化酯（與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同）SuperFlour系列熒光探針，具有更強的熒光強度，更廣的pH應(yīng)用范圍（pH4～10）,更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1．標記效率低——計算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標記的熒光團少于4mol有以下原因：1）緩沖液中含有痕量伯銨成分，與染料反應(yīng)降低了標記效率。如果蛋白已經(jīng)溶于含氨基的緩沖液（如Tris或氨基乙酸），標記前用PBS透析。2）蛋白含量較低(≤1mg/mL)會影響標記效率。3）標記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應(yīng)混合物的pH升高至～8，因為在弱堿性環(huán)境中標記反應(yīng)的效率比較高。如果蛋白溶液的緩沖范圍在低pH，加入重碳酸鹽也無法將pH調(diào)節(jié)至**適水平。要么加大重碳酸鹽的量，要么將緩沖液換成PBS，或用0.1M碳酸氫鈉透析等。4）研究顯示pH升至9.0～9.4，標記效率和標記速度（只需10min）明顯改善。5）不同抗體與熒光團的反應(yīng)速率不同，染料標記后保留的生物活性程度也不同，因此標準步驟也不是總有比較好的標記結(jié)果。為增加標記率，可以對同一樣品進行再標記，或減少蛋白的量加大染料的量重新標記。有研究者在室溫孵育1小時后再4℃孵育過夜，情況有所改善。脂溶性熒光染料cy3、cy5、cy7等。江西石家莊熒光染料

D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。外泌體熒光染料熒光素鉀鹽

納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸，納米粒子通常用于不同類型的細胞和組織的熒光成像。當今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點、貴金屬納米顆粒、聚合物點、量子點和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中，與其他分子熒光團和探針相比，納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢，使其成為理想的選擇。除了提高亮度外，納米粒子是惰性的并且往往分布均勻，這有助于在成像過程中獲得更好的結(jié)果。此外，與各種分子熒光團相比，納米顆粒和納米材料沒有細胞毒性，并且不受非特異性結(jié)合問題的影響。由于這些特性，大多數(shù)熒光納米顆粒（染色納米顆粒）可以內(nèi)化到細胞/組織中，并容易靶向給定部位。外泌體熒光染料熒光素鉀鹽