小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質(zhì)粒來實現(xiàn)，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別，然后允許小RNA結(jié)合以抑制熒光素酶的表達(dá)。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對宿主細(xì)胞中特定基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調(diào)控能力而聞名，更具體地說，是轉(zhuǎn)錄后對特定基因表達(dá)的調(diào)控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統(tǒng)相關(guān)的特定基因的質(zhì)粒DNA可以同時共轉(zhuǎn)染到靶細(xì)胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達(dá)將導(dǎo)致熒光素酶活性***降低。共轉(zhuǎn)染還可能涉及不同的小分子如miRNAs，這有助于研究小RNA對靶宿主細(xì)胞的影響。例如，如果引入miRNA模擬物可以影響特定細(xì)胞類型中特定下游基因的表達(dá)，那么預(yù)計將其抑制劑序列同時轉(zhuǎn)染到同一細(xì)胞中會降低單獨miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用。與單一核酸類型的轉(zhuǎn)染相比，涉及將多個核酸轉(zhuǎn)移到同一細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)染通常更多挑戰(zhàn)性更大，因為并非所有核酸類型都能有效轉(zhuǎn)移，這可能取決于轉(zhuǎn)染方法和所涉及的細(xì)胞類型。不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。遼寧轉(zhuǎn)染試劑企業(yè)

攜帶要轉(zhuǎn)染的特定核酸的載體構(gòu)建可以進(jìn)一步分為病毒載體或質(zhì)粒載體。病毒和質(zhì)粒通過存在合適的真核啟動子促進(jìn)外源轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。病毒載體可能在宿主細(xì)胞中觸發(fā)免疫原性反應(yīng)，而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進(jìn)靶向核酸或載體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質(zhì)載體或非脂質(zhì)載體，以幫助增強載體載體復(fù)合物與宿主細(xì)胞膜之間的接觸，從而促進(jìn)復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞。設(shè)計和啟動轉(zhuǎn)染試驗可能具有挑戰(zhàn)性，特別是可供選擇的轉(zhuǎn)染方法或策略種類繁多的情況下。長沙轉(zhuǎn)染試劑毒性低納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運到細(xì)胞中的保護(hù)能力，在不久的將來可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。

deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。通過用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化，這使得它可以自組裝成帶負(fù)電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個用于核酸轉(zhuǎn)染的陽離子聚合物。早在20世紀(jì)50年代，它就極大地增強了脊髓灰質(zhì)炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染。隨后，deae -葡聚糖被廣泛應(yīng)用于RNA或DNA的轉(zhuǎn)染。然而，由于以下原因，deae -葡聚糖并沒有作為比較好候選物:轉(zhuǎn)染效率遠(yuǎn)低于脂質(zhì)體等其他試劑;deae -葡聚糖的細(xì)胞毒性和免疫原性不容忽視。

質(zhì)子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測量來評估，也可以通過化學(xué)測量來評估，在化學(xué)測量中，表達(dá)的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當(dāng)?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細(xì)胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進(jìn)行基因組編輯。除了使用多個質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細(xì)胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達(dá)兩種不同基因的載體，通過一個內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點連接，只有一個啟動子?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。

人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的比較大挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。2015年，王等報道了Lipofectamine 2000和XtremeGENE HP等轉(zhuǎn)染試劑在人牙周韌帶干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率非常低(<6%)，而陽性對照慢病毒載體的轉(zhuǎn)染效率約為95%。與同一研究中采用的磁輔助轉(zhuǎn)染技術(shù)相比，后者表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率(～11%)和更低的毒性。在另一項涉及人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBM-MSC)的研究中，Lipofectamine LTX被證明比TransIT-2020、Lipofectamine 3000和聚乙烯亞胺(PEI)等其他試劑產(chǎn)生比較好的轉(zhuǎn)染效率(至少高出三倍)，但細(xì)胞存活率較低(<50%)。相比之下，使用TransIT-2020試劑可能會獲得更好的結(jié)果，該試劑的效率約為30%，細(xì)胞回收率高達(dá)90%，細(xì)胞干性約為95%。另一個難以轉(zhuǎn)染干細(xì)胞的例子是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)。在一項比較轉(zhuǎn)染人類ipsc衍生心肌細(xì)胞(hiPSC-CMSs)的不同非病毒方法的研究中，與其他試劑(Lipofectamine 3000、Lipofectamine 2000和基于pei的非脂質(zhì)體試劑TransporterTM5和PEI25)相比，Lipofectamine STEM顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率(高達(dá)32%)，其效率低于20%。隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率。湖北干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs)。遼寧轉(zhuǎn)染試劑企業(yè)

基于病毒的轉(zhuǎn)染，或者更具體地稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細(xì)胞。逆轉(zhuǎn)錄病毒，如慢病毒，通常用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。相比之下，腺病毒、腺相關(guān)病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的病毒載體。與非病毒轉(zhuǎn)染相比，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)被***認(rèn)為是一種轉(zhuǎn)染難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(如原代細(xì)胞)的高效方法。一般來說，逆轉(zhuǎn)錄病毒只能用于轉(zhuǎn)染分裂細(xì)胞，而腺病毒、AAV和皰疹病毒可用于轉(zhuǎn)染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞。然而，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)與較高的細(xì)胞毒性相關(guān)，并可能造成病毒***的風(fēng)險。病毒載體通常包含一個病毒包膜，它包圍并保護(hù)病毒。表面蛋白可能存在于某些類型的病毒(如腺病毒)的表面，以促進(jìn)與宿主細(xì)胞的接觸和通信。病毒遺傳物質(zhì)被包裹在衣殼中，進(jìn)入宿主細(xì)胞后，衣殼將被打開。與腺病毒、aav和皰疹病毒的基因組不同，這些病毒的基因組是單獨維持的，逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組被整合到宿主基因組中。通常，腺病毒和皰疹病毒攜帶雙鏈DNA, AAV攜帶單鏈DNA，而逆轉(zhuǎn)錄病毒攜帶RNA。遼寧轉(zhuǎn)染試劑企業(yè)