DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度**增強,這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色,這類染料在整個細胞膜上擴散,比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯:DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)和 DiR (深紅色熒光)這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā),有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長,在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織,在***成像中用來示蹤。Cy7 DiC18(DiR)是一個親脂性、近紅外熒光花青染料,這個染料常用于標記細胞質(zhì)膜。長沙熒光染料luciferin
本質(zhì)上,有機染料的特征在于源自在整個生色團上離域的光學躍遷或源自分子間電荷轉(zhuǎn)移躍遷(從激發(fā)電子態(tài)的分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移)的發(fā)射。在這里,表現(xiàn)出源自在整個生色團上離域的光學躍遷的發(fā)射的染料被稱為共振染料(介觀染料),而后者被稱為CT染料(電荷轉(zhuǎn)移染料)?;ㄇ?、羅丹明和熒光素是一些最常見的共振染料,其特點是窄的吸收和發(fā)射帶(略微結構化),往往相互鏡像,以及小的、對溶劑極性不敏感的斯托克斯位移。另一方面,CT染料包括香豆素和丹磺酰熒光團等染料,其特點是與共振染料相比,吸收和發(fā)射帶結構無結構,分離良好,以及更大的斯托克斯位移。同樣,與共振染料相比,CT染料具有更小的摩爾吸收系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率。對于共振和CT熒光染料,在結構-性質(zhì)關系眾所周知的情況下,可以通過精心設計的策略來微調(diào)光譜性質(zhì)。山東青島熒光染料吲哚菁綠的主要作用之一是在醫(yī)學影像學中作為造影劑。
在1990年代***使用的綠色熒光蛋白(從水母維多利亞水母克隆)及其衍生物(例如藻紅藍蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等)是當今生物學研究中**常用的一些生物熒光團。雖然熒光團可用于在細胞、細菌和各種***中表達質(zhì)粒,但它們的使用有一些缺點,即它可能很耗時,并且在融合時還能夠改變某些細胞蛋白的正常生物學功能。此外,與許多其他熒光團相比,生物熒光團的光穩(wěn)定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當下流行的生物熒光團之一,由238個氨基酸組成,其中三個負責發(fā)出可見綠色熒光的結構。在水母本身中,熒光團與水母發(fā)光蛋白(一種蛋白質(zhì))相互作用,當添加鈣時會發(fā)出藍光。通過DNA重組,研究人員可以使用負責產(chǎn)生蛋白質(zhì)的基因來研究給定的基因和蛋白質(zhì)。在這里,在將復合物插入細胞之前,該基因與另一個基因(負責產(chǎn)生所需蛋白質(zhì)的第二個基因)結合。如果細胞產(chǎn)生綠色熒光,研究人員就可以明顯看出該細胞能夠表達目標基因。GFP由488nm激光線激發(fā),可在510nm處檢測。來自熒光團的微弱信號可以使用抗GFP抗體放大。作為生物標記物,綠色熒光蛋白用于以下功能:監(jiān)測各種生理過程*識別蛋白質(zhì)定位*檢測轉(zhuǎn)基因表達
過標記——計算結果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標記的熒光團大于10mol。雖然過標記的蛋白也可以使用,但可能會引起蛋白的聚集、降低抗體結合抗原的特異性,這些都會造成非特異性結合。過標記還會引起熒光淬滅??梢栽黾拥鞍谆驕p少反應時間。3.未結合染料難以去除——盡管大部分時候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯(lián)物,但仍可能會有痕量的游離染料留在偶聯(lián)物溶液中,會使標記計算的值偏高??捎梅蛛x柱再次分離或透析去除。4.蛋白或蛋白偶聯(lián)物無法洗脫——不要再加緩沖液,只需再次離心一次或幾次。羅丹明123一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。
CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫,是由奇數(shù)個甲基單元連接的兩個氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長長、吸收和發(fā)射可調(diào)、消光系數(shù)高的特點CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標記,對于蛋白抗體的標記,可以通過簡單的混合反應來完成結合,下面我們介紹了蛋白抗體標記的標記方法,具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標記效果,請制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0,應使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL,標記效率會**降低。為獲得比較好標記效率,建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中,和銨離子,否則會影響標記效率。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中,制備成10mM儲備液。通過移液器或渦旋混合均勻計算。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個可進行后續(xù)標記實驗。CY7 是一種 CY 染料。CY 為花菁 (Cyanine) 的縮寫,是由奇數(shù)個甲基單元連接的兩個氮原子組成的化合物。青島熒光染料Fluor 750
南京星葉生物提供多種性價比高的各類活化熒光素,例如Cy系列、Super Fluor 系列(效果同Alexa Fluor系列)等。長沙熒光染料luciferin
熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后,能把短波長的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來,呈閃亮的鮮艷色彩。例如,酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用,也可以組合成復合熒光染料使用。其中復合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術合成的熒光染料,由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復合染料在受體分子的激發(fā)波長被激發(fā),在供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子。熒光染料發(fā)展非常迅速,已開發(fā)的用于科研和臨床應用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。長沙熒光染料luciferin