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評(píng)估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要,特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中??梢赃x擇多種策略來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)是一種通過(guò)直接測(cè)量特定外源蛋白表達(dá)水平來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的定量方法。細(xì)胞內(nèi)核酸或其他可能受到外源核酸(如miRNAs)...
其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)常用染料生物染料在細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應(yīng)用,除細(xì)胞膜研究外,我們經(jīng)常也會(huì)對(duì)一些其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)及成分進(jìn)行探索,例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細(xì)胞核等,而對(duì)于不同的細(xì)胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進(jìn)行染色細(xì)胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色...
納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸,納米粒子通常用于不同類型的細(xì)胞和組織的熒光成像。當(dāng)今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點(diǎn)、貴金屬納米顆粒、聚合物點(diǎn)、量子點(diǎn)和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中,與其他分子熒光團(tuán)和探針相比,納米顆粒...
陽(yáng)離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進(jìn)膜融合,并有助于質(zhì)膜或核內(nèi)體的不穩(wěn)定。此外,由于陽(yáng)離子脂質(zhì)相互排斥,因此需要DOPE等輔助脂質(zhì)來(lái)穩(wěn)定陽(yáng)離子脂質(zhì)體(CLs)懸浮液,并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹...
**近的研究已經(jīng)確定了陽(yáng)離子脂質(zhì)體(CLs)的某些特征,這些特征增強(qiáng)了它們?cè)隗w內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)核酸的能力。這些特征包括陽(yáng)離子頭基團(tuán)及其鄰近的脂肪鏈在主鏈上呈1,2關(guān)系,醚鍵用于橋接脂肪鏈到主鏈,成對(duì)的油基鏈作為疏水系鏈。無(wú)論如何,這些特征雖然不能決定細(xì)胞培養(yǎng)中更好的轉(zhuǎn)染...
CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。它具有出色的熒光性能和良好的生物相容性。Cy5屬于小分子染料,其*大發(fā)射波長(zhǎng)為670nm,其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀,檢測(cè)通道一般是FL4...
基因和RNAi***在臨床上的應(yīng)用需要安全高效的載體。迄今為止,核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關(guān)的安全問(wèn)題有很多:誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)、不必要的突變和**。因此,在開發(fā)基于脂質(zhì)或聚合載體的非病毒載體是勢(shì)在必行的。1965年,Vahe...
在1990年代***使用的綠色熒光蛋白(從水母維多利亞水母克隆)及其衍生物(例如藻紅藍(lán)蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等)是當(dāng)今生物學(xué)研究中**常用的一些生物熒光團(tuán)。雖然熒光團(tuán)可用于在細(xì)胞、細(xì)菌和各種***中表達(dá)質(zhì)粒,但它們的使用有一些缺點(diǎn),即它可能很耗時(shí),并且在融合...
熒光染料標(biāo)記蛋白或肽技術(shù)是一種常見的蛋白質(zhì)體外標(biāo)記技術(shù)。除了GFP等熒光蛋白的融合表達(dá)外,目標(biāo)蛋白還可以通過(guò)熒光染料標(biāo)記直接進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)操作,如***跟蹤、細(xì)胞分選等。 FITC熒光標(biāo)記的原理是什么? 熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材...
SuperFluor活化酯(與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同)SuperFlour系列熒光探針,具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度,更廣的pH應(yīng)用范圍(pH4~10),更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy...
deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。通過(guò)用二乙基氨基乙基修飾,右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化,這使得它可以自組裝成帶負(fù)電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個(gè)用于核酸轉(zhuǎn)染的陽(yáng)離子聚合物。早在20世紀(jì)50年代,它就極大地增強(qiáng)了脊髓灰質(zhì)炎病毒和...
在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后,轉(zhuǎn)基因表達(dá)相對(duì)短暫。靜脈注射脂叢的肺表達(dá)比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達(dá)量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機(jī)制可能有以下幾種:(a)產(chǎn)生針對(duì)外源基因產(chǎn)物的新***抗體,(b)細(xì)胞因子介導(dǎo)的啟動(dòng)子關(guān)閉,(c)通過(guò)凋亡、...
陽(yáng)離子聚合物是一種非病毒載體,其結(jié)構(gòu)的一個(gè)共同特征是分子中存在許多帶正電的基團(tuán),這些基團(tuán)被質(zhì)子化成帶正電的聚合物。陽(yáng)離子聚合物可以通過(guò)靜電相互作用結(jié)合核酸,并將其凝聚成小的納米顆粒。正電荷改善了與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜的相互作用,并幫助多聚體在溶酶體降解發(fā)生之前逃離...
藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物,屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到,它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學(xué)中,熒光團(tuán)可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,例如用于抗原檢測(cè)的抗體等,因?yàn)樗軌虬l(fā)出明亮的熒光。由于熒光團(tuán)往往會(huì)很快發(fā)生光漂白,因此很少在熒光...
SUPERGreenI(10,000×DMSO溶液,電泳級(jí))儲(chǔ)存條件及注意事項(xiàng)4℃避光可保存12個(gè)月。本品用DMSO溶解,因DMSO的熔點(diǎn)是18.5℃,使用前請(qǐng)放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點(diǎn)●無(wú)毒性:屬花菁類染料,容易生物降解,無(wú)致*毒...
Cy5:激發(fā)波長(zhǎng)633/635nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)670nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測(cè);3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù),熒光強(qiáng)度低于...
DOPC和DEPC是兩親性兩性離?磷脂,可形成蜂窩狀腔室的壁。帶負(fù)電荷的DPPG可阻?MVLs聚集。中性脂類(如三油酯和?油三酯)在雙層交叉點(diǎn)處充當(dāng)疏?空間填充劑,并穩(wěn)定這些膜結(jié)構(gòu)。沒(méi)有中性脂質(zhì),將形成常規(guī)的ULV或MLV,?不是MVLs。配?中中性脂的?量決...
陰離子脂體由帶負(fù)電荷的脂質(zhì)組成,如磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸和磷脂酸,由于它們被巨噬細(xì)胞攝取,循環(huán)時(shí)間縮短。帶負(fù)電的小脂質(zhì)體比其對(duì)應(yīng)的中性和帶正電的脂質(zhì)體被***得更快。此外,在帶負(fù)電荷的小脂質(zhì)體中觀察到一種雙相***模式。 另一方面, 與中性和帶正電的脂質(zhì)體相...
基于病毒的轉(zhuǎn)染,或者更具體地稱為轉(zhuǎn)導(dǎo),涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細(xì)胞。逆轉(zhuǎn)錄病毒,如慢病毒,通常用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。相比之下,腺病毒、腺相關(guān)病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的病毒載體。與非病毒轉(zhuǎn)染相比,病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)被***認(rèn)為是一種轉(zhuǎn)染難以轉(zhuǎn)染的...
非病毒載體通常具有比病毒載體更低的轉(zhuǎn)染效率,但由于它們被認(rèn)為要安全得多,因此已被***研究。納米顆粒遞送系統(tǒng),其中陽(yáng)離子脂質(zhì)納米顆粒通過(guò)核酸的負(fù)磷酸基團(tuán)裝載,是一類主要的非病毒載體,顯示出高生產(chǎn)力和裝載效率。用于攜帶核酸的納米顆粒系統(tǒng)在整體上可分為基于脂質(zhì)或聚...
脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽(yáng)離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs),是由非離子核酸與陽(yáng)離子脂質(zhì)體(CLs)表面結(jié)合,**終形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。帶負(fù)電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面,**初與??吭陉?yáng)離子囊泡表面的核酸分子形成復(fù)合物,然后發(fā)展到核酸分子持續(xù)粘在...
除了mRNA疫苗,DNA疫苗也是不錯(cuò)的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下,研究人員集中研究了將合成t細(xì)胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進(jìn)了PG和PAMAM G4復(fù)合物的大小、運(yùn)動(dòng)性和表面電荷,然后在...
基因遞送用脂質(zhì)體隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,與人類基因組及其在疾病***中的應(yīng)用相關(guān)的各種發(fā)現(xiàn)變得更加觸手可及。盡管有了這些發(fā)展,選擇一個(gè)合適的載體將基因傳遞到目標(biāo)是至關(guān)重要的。其中一種重要的載體是脂質(zhì)體,它可以將DNA、反義寡核苷酸、siRNA和其他潛在的藥物輸送到...
核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有影響。在一項(xiàng)涉及原代人成肌細(xì)胞的研究中,使用不同的核酸比例來(lái)比較轉(zhuǎn)染效率的影響,轉(zhuǎn)染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個(gè)***發(fā)現(xiàn)是,轉(zhuǎn)染效率可能不一定與所用試劑的...
基于病毒的轉(zhuǎn)染,或者更具體地稱為轉(zhuǎn)導(dǎo),涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細(xì)胞。逆轉(zhuǎn)錄病毒,如慢病毒,通常用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。相比之下,腺病毒、腺相關(guān)病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的病毒載體。與非病毒轉(zhuǎn)染相比,病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)被***認(rèn)為是一種轉(zhuǎn)染難以轉(zhuǎn)染的...
微泡表面的電荷和配體可以用來(lái)增加靶向的特異性。Lindner等人發(fā)現(xiàn),由于與先天免疫系統(tǒng)的相互作用,陽(yáng)離子微泡在經(jīng)歷缺血/再灌注和炎癥的組織的微循環(huán)中持續(xù)存在。然而,考慮到生物環(huán)境的復(fù)雜性,靜電相互作用通常沒(méi)有足夠的特異性。另一方面,配體-受體相互作用在生物介...
固體脂質(zhì)納米顆粒和納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體雖然脂質(zhì)體作為藥物載體是有用的,但它們需要使用有機(jī)溶劑的復(fù)雜生產(chǎn)方法,在包裹藥物方面表現(xiàn)出低效率,并且難以大規(guī)模執(zhí)行。固體脂質(zhì)納米顆粒(SLN)和納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(NLC)的開發(fā)是為了解決這些缺點(diǎn)。傳統(tǒng)的脂質(zhì)體由液晶脂質(zhì)雙層組...
基因注射包括通過(guò)注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細(xì)胞核中。當(dāng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染具有挑戰(zhàn)性時(shí),特別是當(dāng)需要對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾時(shí),這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣,沒(méi)有一種方法可以適用于所有不同的細(xì)胞類型,選擇合適的細(xì)胞類型和核酸大小對(duì)于確保...
脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過(guò)網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,并被困在核內(nèi)小體中,從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來(lái),進(jìn)入核周區(qū)域,***進(jìn)入細(xì)胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質(zhì)體載體的物理化學(xué)性質(zhì)。Friend和同事描述了可能由脂質(zhì)體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)...
評(píng)估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要,特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中??梢赃x擇多種策略來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)是一種通過(guò)直接測(cè)量特定外源蛋白表達(dá)水平來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的定量方法。細(xì)胞內(nèi)核酸或其他可能受到外源核酸(如miRNAs)...