在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細胞間的蛋白質(zhì),破壞細胞間的連接,從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關(guān),在PH 8.0和37℃時,胰酶的作用能力**強,因此使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細胞或?qū)σ让该舾?..
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內(nèi)的腸肽酶會活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶,能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原,這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會將蛋白質(zhì)水解為肽進而分解為氨基酸,其**適溫度約為 37°℃。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶組成,不含 EDTA,經(jīng)過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下 1min 左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細胞。該溶液濃度較高,可以稀釋到相應(yīng)濃度后使用。細胞培養(yǎng)中胰酶的作用一般是分解脂肪等。甘肅重組胰酶生產(chǎn)企業(yè) 細胞...
對一般細胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,Trypsin)配方:100mlPBS,0.25g胰酶步驟:1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中,低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾,分裝,-20℃保存,4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,機械攪拌對酶是一種沖擊,如果起沫,酶就變性了。低溫,防止酶失活對難消化的細胞:在上述配方中,加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:...
胰蛋白酶廣泛應(yīng)用于食品加工、制藥、生化檢測和制革等多種行業(yè)。在制藥工業(yè)中,胰蛋白酶可使天然蛋白、變性蛋白、纖維蛋白和黏蛋白等水解為多肽或氨基酸,以達到***的目的。胰蛋白酶生物藥用于***呼吸道疾病,可以溶解黏痰和膿性痰,還可以***毒蛇咬傷等。由于血清中含有非特異性抑肽酶,故胰蛋白酶不會消化正常組織,而能分解膿性痰等黏性分泌物,促進***、化療藥物向病灶滲透。在食品工業(yè)中,胰蛋白酶主要用于水解價值較高的動植物性蛋白等,以牛乳為例,利用胰蛋白酶水解其中的酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白等致敏原,能生產(chǎn)低敏配方奶粉。在制革工業(yè)中,胰蛋白酶用于皮革脫灰軟化,也可以利用胰蛋白酶提取具有良好生物相容...
胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關(guān),在pH為8.0、溫度為37°℃時,胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。山西胰酶價格 ①制備粗酶液稱取定量粗胰酶,其胰蛋白酶活性為,...
胰蛋白酶**點評胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀,易于引流排痰,加速創(chuàng)面愈合凈化,促進肉芽**增生,而不損傷正常**,臨床上有消消腫功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶細胞培養(yǎng)胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。不同的**或者細胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關(guān),在pH為、溫度為37℃時,胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或...
收藏查看我的收藏0有用+1已投票0胰蛋白酶編輯鎖定本詞條由“科普**”百科科學(xué)詞條編寫與應(yīng)用工作項目審核。胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)為蛋白酶的一種,EC,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中,作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后,作為胰液的成分而分泌,受腸激酶,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,是肽鏈內(nèi)切酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。是特異性**強的蛋白酶,在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中,它成為不可缺少的...
胰酶分裝凍存時要注意什么?胰酶分裝時盡量分裝成多瓶,并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時體積會膨脹,多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全?注意:不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙狀移動就可以了,就應(yīng)該停止消化。6、胰酶適用于哪些細胞消化?它的消化效果與哪些有關(guān)呢?胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞,如胚胎、上皮、肝、腎等組織,但對纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。胰蛋白酶是一種動物源...
細胞傳代消化時所用胰酶濃度?常見濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑),半貼壁細胞或者對胰酶敏感的細胞,可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進行細胞消化。由于細胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性,常見的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細胞貼壁不是非常緊密,也可用不含有螯合劑的胰酶進行細胞消化。胰酶對細胞膜上粘附蛋白的損害比較大,如果進行細胞膜上蛋白的研究,建議選擇溫和的細胞消化試劑,盡量減少對細胞膜上蛋白的損傷。此外,由于胰酶自身也是一種蛋白,胰酶也會自己剪切自己,建議胰酶不要反復(fù)凍融,拿到手中的大瓶胰酶進行分裝使用。除了常見的胰酶(含有或者不含有EDTA)。適用于貼壁細胞的消...
但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。沉降系數(shù)S20W為,pI=,熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定,Ca2+對酶的保護作用不及牛羊的明顯,無螯合Ca2+的中心部位。有6對二硫鍵,斷裂1~2個鍵,均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護了酶的活性。酶的活力分別相當(dāng)于牛的72%及羊的61%。羊胰蛋白酶與牛、豬的相似,但其活力略高于牛和豬的。胰蛋白酶專一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶,由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶,再進一步降解為擬胰蛋白酶,乃至碎片,活力也逐步下降而喪失。除存在于脊椎動物外,還存在于蠶、海盤車、蝲姑、放線菌等范圍***的生物體中。另外與高等動物的血液凝固和癥等...
胰酶消化細胞的原理胰酶消化細胞是一種用來分解細胞質(zhì)和細胞間物質(zhì)的化學(xué)過程它可以被看成一種簡單的動力學(xué)過程,它將細胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì),然后這些留下的物質(zhì)可以用來維持細胞的高能量水平這種過程通過將脂肪、蛋白質(zhì)、糖類和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來發(fā)生。胰酶是細胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子,通常有四種類型,它們是肽酶,脂水解酶,載脂蛋白酶和糖水解酶,分別可以將蛋白質(zhì)、脂肪、脂蛋白和糖類物質(zhì)分解為更小的離子和分子,以便細胞可以更好地吸收物質(zhì),維持其自身的正常功能和形態(tài)。EDTA是一種二價金屬離子螯合劑,用于結(jié)合抑制胰蛋白酶活性的鈣離子和鎂離子。安徽進口胰酶供應(yīng)商胰蛋白酶(T...
胰蛋白酶:(Trypsin)為蛋白酶的一種,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。由223個氨基酸殘基組成的單鏈多肽,主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。作用是使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關(guān),在pH為、溫度為37℃時,胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對細胞的作用。有些細胞容易消化(如雞胚原代成纖維細胞)可用胰酶進行消化,可以不加E...
胰酶的作用原理是什么呢?胰酶是一種蛋白酶,酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈,通過在特定位置上降解蛋白,使細胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時細胞在自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。使用胰酶時需注意哪些細節(jié)問題?在使用胰酶(Trypsins)細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差,做流式時的CDMarker也可能會下降。胰酶進行分裝時盡量分裝成多瓶,并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時液體體積會膨脹,多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會降低消化效果并可...
胰酶細胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶(Trypsin)、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2+和Mg2+。該消化液已用0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細胞消化液具有方便快速的特點,通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細胞。使用說明:貼壁細胞的消化:1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細胞消化液(含酚紅),略蓋過細胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細...
對一般細胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,Trypsin)配方:100mlPBS,0.25g胰酶步驟:1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中,低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾,分裝,-20℃保存,4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,機械攪拌對酶是一種沖擊,如果起沫,酶就變性了。低溫,防止酶失活對難消化的細胞:在上述配方中,加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:...
在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細胞間的蛋白質(zhì),破壞細胞間的連接,從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關(guān),在PH 8.0和37℃時,胰酶的作用能力**強,因此使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細胞或?qū)σ让该舾?..
6.磷酸酶EDTA相對不溶。可以用磁力攪拌器攪拌,或?qū)⑵渲糜?度的冰箱中,溶解后過濾并**。7.可配備2-3倍血漿酶,節(jié)省時間和過濾器。使用時,請對PBS消毒。8.將儲存溶液儲存在-20°C的冰箱中,然后將溶液儲存在4°C。使用時,請勿將其放在27°C的水浴中,因為這會使自由基酶迅速無法使用。使用前放置一次。是的,因為添加的數(shù)量很少,因此通常不會凍結(jié)細胞。9.在消化過程中,向培養(yǎng)瓶中加入適量的胰酶。個人經(jīng)驗,一般在10cm培養(yǎng)皿中加。加入后,立即搖動培養(yǎng)皿蓋住胰酶。一旦充滿,用負壓吸引多余的胰酶排出,將其加入37度培養(yǎng)箱中進行消化。10.請注意,過量的胰酶對細胞有害,而過量的EDTA也...
0.25%胰酶是細胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。 胰酶的使用濃度是多少?胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。 胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長,胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存,在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。胰酶使用的時候要注意什么?(1)在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。(2)胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。 胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。福建重組胰酶進貨價 胰蛋白酶用法用量1.每次~5mg,用蒸餾水5...
在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶(Trypsin),EDTA等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細胞間的蛋白質(zhì),破壞細胞間的連接,從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關(guān),在℃時,胰酶的作用能力**強,因此使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為,而半貼壁細胞或?qū)σ让该舾械募毎2捎玫蜐舛龋ǎ?..
胰蛋白酶**初在牛的胰腺中被發(fā)現(xiàn),現(xiàn)在已經(jīng)擴展到多種來源,包括哺乳動物(人、牛、豬和狗)、無脊椎動物和微生物等。胰蛋白酶的商業(yè)化生產(chǎn)主要依賴哺乳動物的胰腺組織提取或者重組表達提取。直接從哺乳動物胰腺組織中提取的缺點是生產(chǎn)成本高,易造成其他結(jié)構(gòu)相近的蛋白污染。重組表達提取胰蛋白酶可以縮短提取時間、降低生產(chǎn)成本,提取的蛋白純度高,通過優(yōu)化重組表達體系可以提高蛋白的表達量,這些優(yōu)勢為其在醫(yī)療、食品等行業(yè)中的應(yīng)用提供了更多的可能性。[1]折疊不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。中國香港進口胰酶大概價格多少 在253nm的波長處測定吸光度,必要時可用上述底物原液或磷...
冰凍保存,但不得反復(fù)凍融。供試品溶液的制備取本品適量,精密稱定,加。測定法取底物溶液、(pH)1ml,混勻,作為空白。取供試品溶液(預(yù)熱至25℃±℃),立即計時并搖勻,使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃,照紫外-可見分光光度法(2010年版*典二部附錄ⅣA),在237nm的波長處,每隔30秒讀取吸光度,共5分鐘,每30秒鐘吸光度的變化率應(yīng)恒定,且恒定時間不得少于3分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo),時間為橫坐標(biāo),作圖,取在3分鐘內(nèi)成直線部分的吸光度,按下式計算。式中P為每2500胰蛋白酶單位中含糜蛋白酶的量,單位;A2為直線上開始的吸光度;A1為直線上終止的吸光度;T為A2至A1讀數(shù)的時間,分;W為...
只斷裂賴氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***過程的羧基參胰蛋白酶降解物分析與形成的肽鍵。白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**適pH值~。pH>。Ca2+對酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**劑對其活性有強烈**。臨床用于抗消腫,工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。胰蛋白酶*典標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶來源含量本品系自豬、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品計算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。胰蛋白酶制法要求本品應(yīng)從檢*合格的牛、羊或豬胰中提取,生產(chǎn)過程應(yīng)符合現(xiàn)行版《*品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。胰蛋...
收藏查看我的收藏0有用+1已投票0胰蛋白酶編輯鎖定本詞條由“科普**”百科科學(xué)詞條編寫與應(yīng)用工作項目審核。胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)為蛋白酶的一種,EC,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中,作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后,作為胰液的成分而分泌,受腸激酶,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,是肽鏈內(nèi)切酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。是特異性**強的蛋白酶,在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中,它成為不可缺少的...
只斷裂賴氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***過程的羧基參胰蛋白酶降解物分析與形成的肽鍵。白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**適pH值~。pH>。Ca2+對酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**劑對其活性有強烈**。臨床用于抗消腫,工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。胰蛋白酶*典標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶來源含量本品系自豬、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品計算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。胰蛋白酶制法要求本品應(yīng)從檢*合格的牛、羊或豬胰中提取,生產(chǎn)過程應(yīng)符合現(xiàn)行版《*品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。胰蛋...
品名:0.25%胰蛋白酶溶液,1X分類:細胞消化試劑規(guī)格:100ML用途:消化試劑,如胰蛋白酶,被用于將粘附細胞從其附著的表面或底物上分離和降解,以及將組織進行游離,以開展原代細胞培養(yǎng)。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶(1:250)以及一種新型非哺乳動物豬胰蛋白酶替代品,稱為ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液,可以快速消化,同時不損傷細胞。其非哺乳動物配方使它適用于無血清應(yīng)用,不需要失效或?qū)γ敢种苿?。此試劑可使細胞被快速分離,形成單細胞懸浮物,保持高細胞活力,并使傳代時的變異減至**小。胰酶細胞消化液(不含EDTA...
(不含EDTA含酚紅)性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝背景胰酶又名胰醇素、胰液素。白色或淡黃色無定形粉末。系從各種動物胰臟制取的混合物,主要是蛋白酶、脂酶、淀粉酶。溶于水呈微渾溶液。不溶于醇、醚。有引濕性,遇酸、堿及熱即喪失活力,水溶液遇酸、熱、重金屬或單寧酸時產(chǎn)生沉淀。為助消化藥,用于缺乏胰液的***癥。也用于皮革工業(yè)和紡織印染,主要用于酶法脫毛。將絞碎的豬胰漿經(jīng)***、提取、沉淀、脫脂、干燥、粉碎而得。簡介(不含EDTA含酚紅)為細胞培養(yǎng)基,1.不含EDTA含酚紅:含酚紅,(1:250)溶于HBSS溶液,不含鈣鎂。-20℃保存。胰(不含EDTA含酚紅)含,不含EDTA和酚紅,溶于無鈣鎂平衡...
0.25%胰酶是細胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。 胰酶的使用濃度是多少?胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。 胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長,胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存,在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。胰酶使用的時候要注意什么?(1)在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。(2)胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。 胰酶細胞消化液(Trypsin-EDTA Solution)含0.25%胰酶和0.02%EDTA。云南...
品名:0.25%胰蛋白酶溶液,1X分類:細胞消化試劑規(guī)格:100ML用途:消化試劑,如胰蛋白酶,被用于將粘附細胞從其附著的表面或底物上分離和降解,以及將組織進行游離,以開展原代細胞培養(yǎng)。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶(1:250)以及一種新型非哺乳動物豬胰蛋白酶替代品,稱為ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液,可以快速消化,同時不損傷細胞。其非哺乳動物配方使它適用于無血清應(yīng)用,不需要失效或?qū)γ敢种苿4嗽噭┛墒辜毎豢焖俜蛛x,形成單細胞懸浮物,保持高細胞活力,并使傳代時的變異減至**小。在消化酶中,胰酶主要用于促進...
胰酶使用注意:1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。胰酶配制方法:1、培養(yǎng)液配制,方便好用,對細胞影響小,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制,要先調(diào)ph值(①胰酶(1:250)②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時,調(diào),過濾除菌。)3、pbs(:稱取胰酶粉末,先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀,然后補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內(nèi)過夜,過濾滅菌,分裝,4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許...
在253nm的波長處測定吸光度,必要時可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié),使吸光度在~,作為底物溶液。制成后應(yīng)在2小時內(nèi)使用。供試品溶液的制備精密稱取本品適量,加~60胰蛋白酶單位的溶液。測定法取底物溶液,加μl,混勻,作為空白。另取供試品溶液200μl,加底物溶液(恒溫于℃±℃),立即計時,混勻,使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃,照紫外-可見分光光度法(2010年版*典二部附錄ⅣA),在253nm的波長處,每隔30秒鐘讀取吸光度,共5分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo),時間為橫坐標(biāo),作圖;每30秒鐘吸光度的改變應(yīng)恒定在~,呈線性關(guān)系的時間不得少于3分鐘。若不符合上述要求,應(yīng)調(diào)整供試品溶液的濃度,...