細(xì)胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點(diǎn):
1. 無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu):支原體是沒有細(xì)胞壁的微生物,這使得許多作用于細(xì)胞壁的抗*素對(duì)支原體無效。
2. 微小體積:支原體體積小,能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜,例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。
3. 隱匿性:支原體污染初期很難被察覺,它們?cè)谄胀ü鈱W(xué)顯微鏡下幾乎不可見,因此細(xì)胞被支原體污染后,前期很難被發(fā)現(xiàn)。
4. 傳播途徑多樣:支原體可以通過細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。
5. 污染源 :支原體污染源包括細(xì)胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚,以及細(xì)胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。
6. 環(huán)境因素:實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、試驗(yàn)臺(tái)、超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染,引起細(xì)胞的污染。
7. 抗*素耐藥性:支原體可能對(duì)某些抗*素產(chǎn)生耐藥性,使得治*效果變差。
8. 檢測(cè)和清理方法的局限性:一些傳統(tǒng)的支原體檢測(cè)和清理方法可能不夠靈敏或有效,導(dǎo)致難以徹底清理支原體
細(xì)胞培養(yǎng)為什么建議使用支原體檢測(cè)?南京細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測(cè)出現(xiàn)假陰性結(jié)果可能由以下原因引起:
1. 樣本質(zhì)量問題:如果采集的樣本中含有抑制劑或者樣本在處理、存儲(chǔ)過程中出現(xiàn)問題,可能會(huì)影響PCR反應(yīng),導(dǎo)致假陰性。
2. 技術(shù)或操作問題:實(shí)驗(yàn)操作中的誤差,如樣本處理不當(dāng)、試劑配制錯(cuò)誤、儀器設(shè)備問題等,都可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
3. 檢測(cè)方法的局限性:某些檢測(cè)方法可能存在靈敏度或特異性不足的問題,導(dǎo)致無法準(zhǔn)確檢測(cè)到病原體。
4. 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的影響:培養(yǎng)法的靈敏度容易受到培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的影響,如果培養(yǎng)條件不適宜,可能導(dǎo)致支原體無法生長(zhǎng)或生長(zhǎng)緩慢,從而檢測(cè)不到。
5. 支原體種類問題:不是所有的支原體種類都能通過培養(yǎng)法檢測(cè)到,某些特定種類的支原體可能無法在常用的培養(yǎng)基中生長(zhǎng),導(dǎo)致漏檢。
南京細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟?
支原體檢測(cè)的樣本既可以是細(xì)胞,也可以是培養(yǎng)基。在細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體污染是常見的問題,因此需要對(duì)細(xì)胞和培養(yǎng)基進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞庫、病毒種子批、對(duì)照細(xì)胞以及臨床用細(xì)胞等都需要進(jìn)行支原體檢查,這通常包括培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)。同時(shí),病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體,必要時(shí),也可以采用指示細(xì)胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。
此外,支原體檢測(cè)的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,這些培養(yǎng)基可用于檢測(cè)藥品和生物制品中的支原體。在進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí),需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長(zhǎng)的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上。
因此,支原體檢測(cè)的樣本既可以是細(xì)胞,也可以是培養(yǎng)基,具體取決于檢測(cè)的目的和方法。
支原體檢測(cè)中的PCR法和LAMP方法各有其優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì),以下是兩種方法的比較:
PCR法
優(yōu)勢(shì):
1.高靈敏度:PCR法可以擴(kuò)增支原體DNA,具有很高的靈敏度。
2.操作簡(jiǎn)便:PCR操作相對(duì)簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,速度快,通常3個(gè)小時(shí)左右即可得到結(jié)果。
3.可靠性:PCR法已成為日常細(xì)胞培養(yǎng)維護(hù)的可靠方法,是細(xì)胞樣本庫保護(hù)細(xì)胞的方法。
劣勢(shì):
1. 樣品量需求:相對(duì)于某些快速檢測(cè)方法,PCR可能需要較多的樣品量。
2. 檢測(cè)周期:盡管PCR法相對(duì)快速,但在某些情況下,檢測(cè)周期可能較長(zhǎng)。
LAMP法
優(yōu)勢(shì):
1. 設(shè)備簡(jiǎn)單:只需要一個(gè)穩(wěn)定的恒溫環(huán)境,如恒溫水浴或熱擬溫器,不需要復(fù)雜的溫度控制設(shè)備。
2. 高特異性:LAMP技術(shù)采用多個(gè)特異性引物,提供了較高的特異性。
3. 結(jié)果可視化:LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物可形成肉眼觀察的顏色產(chǎn)物,有助于直接觀察擴(kuò)增結(jié)果。
劣勢(shì):
1. 引物設(shè)計(jì)復(fù)雜:需要設(shè)計(jì)多個(gè)引物,包括外部引物、內(nèi)部引物和環(huán)引物,引物設(shè)計(jì)較為復(fù)雜。
2. 避免污染:由于沒有封閉系統(tǒng),避免污染造成的假陽性是一個(gè)問題。
支原體去除之后對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染有無影響?
支原體去除試劑使用后,對(duì)支原體的檢測(cè)可能會(huì)有影響。一些支原體去除試劑通過特異性地與支原體膜結(jié)合、改變支原體膜的通透性來殺死支原體,而對(duì)真核細(xì)胞幾乎沒有影響。然而,某些情況下,去除試劑可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響,尤其是在去除劑作用期間。此外,如果去除劑的效果不徹底,可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞再次被支原體污染。
需要注意的是,某些支原體去除試劑可能會(huì)在去除支原體的過程中導(dǎo)致支原體膜溶解,從而釋放出支原體的DNA,這可能會(huì)在隨后的支原體核酸檢測(cè)中引起假陽性結(jié)果。因此,在去除支原體后,建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細(xì)胞后再進(jìn)行支原體檢測(cè),以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
支原體及污染方式有哪些?南京支原體去除價(jià)格
支原體污染和黑膠蟲污染有什么區(qū)別?南京細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑
對(duì)于同一個(gè)樣品,如果一步法恒溫試劑盒檢測(cè)結(jié)果為陽性,而PCR檢測(cè)為陰性,可能的原因包括:
1. 檢測(cè)的支原體種類不同:一步法恒溫試劑盒可能檢測(cè)的支原體種類更多,例如可以涵蓋27種支原體,而PCR檢測(cè)可能只針對(duì)常見的12種支原體進(jìn)行檢測(cè)。因此,如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測(cè)的范圍內(nèi),就可能出現(xiàn)一步法檢測(cè)為陽性而PCR檢測(cè)為陰性的情況。
2. 靈敏度的差異:PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測(cè)法。PCR可以檢測(cè)到低至單個(gè)拷貝的支原體,而一步法恒溫檢測(cè)可能需要更高的支原體拷貝數(shù),例如10^3^個(gè)拷貝。如果樣品中支原體的數(shù)量低于一步法檢測(cè)的靈敏度閾值,PCR檢測(cè)可能無法檢測(cè)到,導(dǎo)致陰性結(jié)果。
3. 樣品中可能含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì):如果樣品中存在PCR反應(yīng)的抑制物,可能會(huì)影響PCR的擴(kuò)增效率,導(dǎo)致即使存在支原體,PCR檢測(cè)也可能呈現(xiàn)陰性結(jié)果。
4. 試劑盒的特異性和交叉反應(yīng):一步法恒溫試劑盒可能具有更高的特異性,減少了與其他微生物的交叉反應(yīng),從而在PCR檢測(cè)為陰性時(shí)仍能準(zhǔn)確檢測(cè)到支原體的存在。
南京細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑
世途科生物CYTOCH立足于科研,憑借著強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)量管理,通過與學(xué)術(shù)界和產(chǎn)業(yè)界的KOL合作,加快客戶科研成果的轉(zhuǎn)化速度,不斷推動(dòng)行業(yè)的發(fā)展。CYTOCH持續(xù)關(guān)注生命健康相關(guān)的科學(xué)研究,開拓化學(xué)與生物結(jié)合的新思路,為全球用戶供應(yīng)質(zhì)量的產(chǎn)品。CYTOCH將攜手客戶共同探索生命與健康的奧秘,為人類健康做出更大的貢獻(xiàn)。一直以來,中國的生物試劑市場(chǎng)被國外品牌主導(dǎo),國內(nèi)品牌往往只能在低利潤(rùn)和低技術(shù)含量的市場(chǎng)中苦苦競(jìng)爭(zhēng),品牌間的內(nèi)卷導(dǎo)致其無法專注產(chǎn)品本身質(zhì)量而始終無法突破國外品牌的市場(chǎng)格局。CYTOCH致力于成為客戶信賴的中國品牌。