支原體去除的實驗步驟通常包括以下幾個階段:
1. 支原體檢測:在進(jìn)行去除之前,首先要確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染。這可以通過多種方法實現(xiàn),如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法。
2. 選擇合適的去除試劑:一旦確認(rèn)存在支原體污染,需要選擇一種有效的去除試劑。
3. 去除試劑的添加:根據(jù)去除試劑的說明書,將試劑添加到受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。通常,這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中。
4. 孵育:添加去除試劑后,將細(xì)胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時間和條件(如溫度、CO2濃度)應(yīng)根據(jù)試劑的推薦進(jìn)行調(diào)整。
5. 監(jiān)測去除效果:在孵育過程中,定期監(jiān)測細(xì)胞的狀態(tài)和去除效果。這可能包括觀察細(xì)胞形態(tài)、生長速率的變化,以及通過顯微鏡檢查是否有支原體存在的跡象。
6. 后續(xù)檢測:去除過程完成后,再次使用支原體檢測方法確認(rèn)污染是否已被成功。
一步法快速支原體檢測的原理?蘇州支原體預(yù)防試劑價格
支原體檢測的應(yīng)用場景非常廣*,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域:
1. 細(xì)胞培養(yǎng):在實驗室和生物制品工廠中,細(xì)胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變,影響實驗結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此,支原體檢測在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要??蒲兄谐S玫葴財U(kuò)增的方法簡單便捷。
2. 生物制品生產(chǎn):在生物制品的生產(chǎn)過程中,如疫苗、生物藥物等,需要確保產(chǎn)品無支原體污染,以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求在生產(chǎn)的關(guān)鍵階段進(jìn)行支原體檢測。通常采用qPCR的方式進(jìn)行。
深圳細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測方法恒溫擴(kuò)增支原體檢測方法qPCR法?
qPCR法,即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(QuantitativePolymeraseChainReaction)法,在支原體檢測中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個方面:
1. 快速定性檢測:qPCR法可以快速檢測生產(chǎn)原料、細(xì)胞庫、病毒種子、病毒或細(xì)胞收獲液、治*用細(xì)胞中潛在的支原體污染。
2. 臨床樣本檢測:qPCR法可用于檢測實驗室樣本及臨床樣本中的支原體,具有快速、特異性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。
3. 監(jiān)管要求:基于TaqMan的qPCR測定專門針對檢測細(xì)胞治*和復(fù)雜生物生產(chǎn)樣本中的支原體而開發(fā),其性能滿足或超出監(jiān)管要求,如10CFU/mL。
4. 藥物質(zhì)量控制:qPCR法提供早期檢測支原體污染的方法,適用于藥物質(zhì)量控制,具有快速、高度特異性、靈敏性,并符合國際準(zhǔn)則。
細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染了支原體,會有以下幾種影響:
1. 細(xì)胞生長受影響:支原體污染會導(dǎo)致細(xì)胞生長速度減慢,甚至停止生長。細(xì)胞可能會變圓,從培養(yǎng)瓶壁脫落。
2. 細(xì)胞形態(tài)變化:雖然某些細(xì)胞在支原體污染后形態(tài)變化不明顯,但有些細(xì)胞會出現(xiàn)體積增大,細(xì)胞碎片增多,培養(yǎng)瓶中細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積等現(xiàn)象。
3. 代謝和功能改變:支原體污染會影響細(xì)胞的代謝和功能,例如培養(yǎng)液中的精氨酸被大量消耗,引起細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙。支原體活動還可能引起培養(yǎng)液成分和pH值的變化。
4. 實驗結(jié)果受影響:使用被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行實驗會嚴(yán)重影響實驗結(jié)果,因為支原體會抑制細(xì)胞生長,導(dǎo)致染色體畸變,細(xì)胞膜抗原性改變,細(xì)胞復(fù)蘇后存活率降低等。
5. 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的污染:一株污染的細(xì)胞可能成為實驗室的污染源,對工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染,進(jìn)而污染其他細(xì)胞,導(dǎo)致其他細(xì)胞繼發(fā)性污染。
6. 科研結(jié)果的重復(fù)性問題:由于支原體污染,某些實驗結(jié)果可能能在支原體陽性的細(xì)胞中得到,導(dǎo)致科研結(jié)果的重復(fù)性受到影響
什么樣的客戶需要定期檢測支原體污染?
細(xì)胞被支原體污染后可能會出現(xiàn)以下幾種情況:
1. 生長速度變慢:支原體污染的細(xì)胞生長速度可能會減慢,甚至停止生長。
2. 形態(tài)改變:部分細(xì)胞可能會變圓,從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細(xì)胞在支原體污染后,形態(tài)變化可能不明顯,但有些細(xì)胞可能會出現(xiàn)體積增大、細(xì)胞碎片增多等現(xiàn)象。
3. 培養(yǎng)液pH變化:支原體污染的細(xì)胞可能導(dǎo)致培養(yǎng)液pH值變化明顯,更換培養(yǎng)液后幾小時內(nèi)變酸(顏色變黃)。
4. 細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積:在某些情況下,細(xì)胞與細(xì)胞間隙可能出現(xiàn)膜狀沉積,影響細(xì)胞的正常生長和傳代。
5. 細(xì)胞功能受損:支原體污染可能會影響細(xì)胞的代謝和功能,如影響細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、RNA的合成。
6. 染色體畸變:支原體污染可能會導(dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體等異常。
7. 免疫細(xì)胞產(chǎn)量受影響:對于巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的培養(yǎng),支原體污染可能會抑制干擾素的合成和降低其活性。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的污染:污染的細(xì)胞可能成為實驗室的污染源,影響工作區(qū)域、培養(yǎng)箱和液氮罐等。
9. 實驗結(jié)果的不確定性:使用被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行實驗可能會得到不準(zhǔn)確的結(jié)果,影響科研的可靠性。
支原體去除和支原體預(yù)防有什么區(qū)別?蘇州支原體預(yù)防試劑價格
細(xì)胞培養(yǎng)過程中支原體污染怎么預(yù)防?蘇州支原體預(yù)防試劑價格
細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體檢測的重要性體現(xiàn)在以下幾個方面:
1. 高污染發(fā)生率:支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率非常高,據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。
3. 隱匿性強:支原體污染具有很高的隱匿性,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業(yè)檢測試劑盒。
3. 影響實驗結(jié)果:支原體污染會改變細(xì)胞的生理性質(zhì),影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。細(xì)胞培養(yǎng)物一旦被支原體污染,會改變細(xì)胞DNA、RNA及蛋白表達(dá),導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確、不穩(wěn)定。
4. 難以通過肉眼或常規(guī)方法發(fā)現(xiàn):支原體污染無法通過肉眼檢查細(xì)胞來發(fā)現(xiàn),也不能通過向培養(yǎng)基中加入抗*素控制。
5. 對細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)可靠性的影響:支原體污染會降低細(xì)胞系的有效性,使得細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)失去可靠性,無法為生命科學(xué)研究提供有意義的數(shù)據(jù)。
6. 預(yù)防和控制污染的必要性:定期進(jìn)行支原體檢測是細(xì)胞培養(yǎng)實驗室進(jìn)行自我質(zhì)量監(jiān)控的必要組成部分,有助于及時發(fā)現(xiàn)并控制污染,保證實驗的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
7. 避免細(xì)胞株受損:支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞株受損,影響細(xì)胞株的質(zhì)量和研究價值。及時檢測和清*支原體污染有助于保護(hù)珍貴的細(xì)胞資源
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世途科生物簡介:
上海世途科生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的,為全球用戶提供生物試劑的生命科學(xué)企業(yè)。世途科生物(CYTOCH)匯集了一支由海內(nèi)外KOL組成的研發(fā)團(tuán)隊,他們在生物和化學(xué)領(lǐng)域擁有相當(dāng)豐富的研發(fā)經(jīng)驗,通過將化學(xué)與生物技術(shù)相結(jié)合,致力于現(xiàn)有技術(shù)難點突破、新技術(shù)研究,為相關(guān)科學(xué)研究者提供思路和解決辦法。
憑借著強大的研發(fā)實力和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)量管理,通過產(chǎn)學(xué)研合作,加快客戶科研成果的轉(zhuǎn)化,不斷推動行業(yè)的發(fā)展。