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深圳細胞培養(yǎng)支原體檢測方法等溫擴增

來源： 發(fā)布時間：2024-06-14

細胞培養(yǎng)中建議使用支原體檢測的原因主要有以下幾點：
1. 支原體污染率高：常規(guī)細胞培養(yǎng)中支原體污染率保守估計在15-35%之間。
2. 影響實驗結(jié)果：支原體污染會嚴重干擾實驗結(jié)果的可信度，影響培養(yǎng)細胞的形態(tài)和生理特征。
3. 難以用光學(xué)顯微鏡檢測：支原體是極小的細菌，其細胞膜周圍沒有細胞壁，無法用光學(xué)顯微鏡檢測到。
4. 難以消滅：支原體能夠迅速滲透整個實驗室，一旦污染很難徹底消滅。
5. 影響產(chǎn)品質(zhì)量：支原體污染會影響細胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量，監(jiān)管機構(gòu)推薦檢測所有細胞培養(yǎng)產(chǎn)物中是否存在支原體。
6. 保證實驗準確性：定期進行支原體檢測和去除，確保無支原體存在細胞培養(yǎng)體系內(nèi)，才能獲得準確的實驗結(jié)果。
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支原體污染是細胞培養(yǎng)中普遍的問題之一，細胞庫中或正在使用的細胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養(yǎng)：支原體的污染會阻礙細胞生長和增殖 
02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平 
03/ 改變基因表達、細胞信號傳導(dǎo)和形態(tài) 
04/ 損害膜和細胞器 
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化 
06/ 時間、金錢和有價值的細胞丟失：支原體的污染會導(dǎo)致嚴重的經(jīng)濟損失以及研究時間損失
07/ 實驗結(jié)果的不可靠性 
08/ 生物安全問題
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支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細胞培養(yǎng)污染，它們具有各自的特點和區(qū)別：
支原體污染：在相差顯微鏡下，支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。
黑膠蟲污染：在高倍鏡下，被黑膠蟲污染的細胞膜會變得模糊不清，邊界不清晰，有粗糙感。

污染的影響：
支原體污染：可能導(dǎo)致細胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落，影響細胞的DNA、RNA及蛋白表達。
黑膠蟲污染：與細胞競爭性生長，開始時對細胞沒有什么影響，但當(dāng)數(shù)量多時，細胞生長會受到影響直至死亡。

污染的來源：
支原體污染：可能來源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的污染、交叉污染、實驗器材帶來的污染以及用來制備細胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲污染：可能來源于細胞本身的污染或從動物取材時的污染，也可能通過培養(yǎng)箱空氣進行污染。

支原體預(yù)防的主要成分通常是指用于預(yù)防支原體污染的抗*素或化學(xué)試劑。在細胞培養(yǎng)中，預(yù)防支原體污染的措施包括在培養(yǎng)基中添加抗*素，以及采取其他預(yù)防措施來保持實驗室環(huán)境的清潔和無菌操作。以下是一些用于預(yù)防支原體污染的主要成分：
1. 四環(huán)素類抗*素：這類抗*素對支原體具有抑制作用，常用于治*和預(yù)防支原體感*。
2. 大環(huán)內(nèi)酯類抗*素：例如羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等，用于治*肺炎支原體感*。
3. 喹諾酮類藥物：如氧氟沙星、司帕沙星等，也用于治*肺炎支原體感*。
4. 其他抗*素：例如氨基糖苷類、氯霉素等，對支原體有較小的抑制作用。
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檢測新鮮培養(yǎng)基是否有支原體污染，可以采用以下五種方案：
1. 培養(yǎng)法：這是一種傳統(tǒng)且可靠的方法，通過將培養(yǎng)基接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上，觀察是否有支原體生長。這種方法較為耗時，但成本較低。
2. 熒光染色法：使用特定的熒光染料（如Hoechst 33258）對細胞進行染色，然后在熒光顯微鏡下觀察。如果存在支原體污染，可以看到細胞表面或細胞間隙中支原體DNA的熒光染色。
3. PCR法：通過設(shè)計針對支原體特定序列的引物，利用PCR技術(shù)特異性擴增目標DNA。PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，如果出現(xiàn)條帶則表明存在支原體污染。
4. 電鏡觀察法：使用電子顯微鏡直接觀察培養(yǎng)細胞中的支原體污染情況。這種方法可以提供直觀的支原體形態(tài)信息，但設(shè)備要求較高。
5. 一步法恒溫支原體檢測：使用特定的試劑盒，如Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑，采用等溫擴增技術(shù)，通過顏色變化（由藍紫色變?yōu)樘焖{色）進行快速檢測。
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支原體去除和支原體預(yù)防有什么區(qū)別？深圳細胞培養(yǎng)支原體檢測方法等溫擴增

支原體去除后對細胞檢測的影響主要取決于去除方法和去除后的處理。以下是一些可能的影響：
1. 去除方法的影響：不同的支原體去除方法可能對細胞檢測產(chǎn)生不同的影響。例如，一些去除方法可能會對細胞的代謝和增殖產(chǎn)生暫時性的影響，這可能會影響某些類型的細胞檢測。
2. 去除后的處理：去除支原體后，細胞可能需要一段時間來恢復(fù)其正常的生理狀態(tài)。在這段時間內(nèi)，細胞的某些特性可能與去除前不同，這可能會影響細胞檢測的結(jié)果。
3. 細胞恢復(fù)情況：如果細胞在去除支原體后能夠成功恢復(fù)，那么它們在檢測中的表現(xiàn)可能會與未受污染的細胞相似。然而，如果細胞恢復(fù)不完全，可能會影響檢測結(jié)果的準確性。
4. 檢測類型的相關(guān)性：不同的細胞檢測方法對細胞狀態(tài)的敏感性不同。一些檢測可能對細胞的微小變化非常敏感，而其他檢測則可能較為寬容。
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