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IP免疫沉淀磁珠哪個(gè)公司好用

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2024-07-03

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準(zhǔn)備
2. 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測(cè)定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。
3. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
4. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過(guò)夜，以允許抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)充分結(jié)合。
5. 固相支持物的回收：對(duì)于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。
6. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，通常需要多次洗滌固相支持物。
7. 洗脫：使用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復(fù)合物。
8. 后續(xù)分析：對(duì)洗脫的蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質(zhì)譜分析等，以進(jìn)一步分析目標(biāo)蛋白質(zhì)。
免疫沉淀選瓊脂糖珠還是磁珠？IP免疫沉淀磁珠哪個(gè)公司好用

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免疫沉淀實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 樣品制備
a. 懸浮細(xì)胞樣品處理：離心收集細(xì)胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應(yīng)在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）?；靹蚝笾糜诒咸幚?0 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長(zhǎng)期保存）。
b. 貼壁細(xì)胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞兩遍；用細(xì)胞刮棒刮脫細(xì)胞，收集至1.5mL EP管內(nèi)，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應(yīng)在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）。吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長(zhǎng)期保存）。
4. 后續(xù)：磁珠預(yù)處理——抗體吸附——抗原結(jié)合反應(yīng)——抗體洗脫
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免疫沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡(jiǎn)而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用和蛋白質(zhì)特性的重要方法。它具有一些明顯的優(yōu)點(diǎn)，但也存在一些局限性。
優(yōu)點(diǎn):
1. 特異性強(qiáng)：IP技術(shù)利用特異性抗體對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行捕獲，因此具有很高的特異性。
2. 富集低豐度蛋白：可以從小量樣本中富集低豐度的目標(biāo)蛋白，有助于研究稀有蛋白。
3. 研究蛋白質(zhì)相互作用：通過(guò)Co-IP等變體技術(shù)，可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。
4. 操作簡(jiǎn)便：IP實(shí)驗(yàn)步驟相對(duì)簡(jiǎn)單，容易在實(shí)驗(yàn)室中實(shí)施。

缺點(diǎn):
1. 對(duì)抗體質(zhì)量依賴性高：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或?qū)嶒?yàn)失敗。
2. 存在非特異性結(jié)合：樣本中的其他蛋白質(zhì)可能非特異性地結(jié)合到抗體或固相載體上。
3. 可能破壞蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象：裂解和洗滌步驟可能破壞蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)，影響其功能。
4. 可能存在背景噪聲：非特異性結(jié)合可能導(dǎo)致背景噪聲，影響結(jié)果的清晰度和解釋。

免疫沉淀技術(shù)RIP的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

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免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation，簡(jiǎn)稱IP）是一種生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，用于從細(xì)胞或組織裂解物中分離和純化特定蛋白質(zhì)。這項(xiàng)技術(shù)依賴于抗體的高度特異性，通過(guò)抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)的結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的富集和純化。
具體操作步驟通常包括以下幾個(gè)階段：裂解細(xì)胞或組織，抗體與蛋白質(zhì)結(jié)合，固相支持物的使用，免疫復(fù)合物的捕獲，洗滌，洗脫分析。
免疫沉淀技術(shù)不僅可以用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的存在和量，還可以用于研究蛋白質(zhì)的翻譯后修飾、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)的功能等。此外，免疫沉淀技術(shù)是許多其他高級(jí)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的基礎(chǔ)，如染色質(zhì)免疫沉淀測(cè)序（ChIP-Seq）和蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析等。
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ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）實(shí)驗(yàn)是一種用于研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù)。以下是ChIP實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)概述：
1. 目標(biāo)蛋白的選擇：確定您想要研究的目標(biāo)蛋白，例如特定的轉(zhuǎn)錄因子或組蛋白修飾。
2. 樣本的準(zhǔn)備：根據(jù)研究的需要選擇合適的細(xì)胞或組織樣本。
3. 抗體的選擇：選擇具有高特異性和親和力的抗體，這對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。
4. 交聯(lián)：使用甲醛等交聯(lián)劑將蛋白質(zhì)與DNA在體內(nèi)共價(jià)結(jié)合，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。
5. 細(xì)胞裂解：裂解細(xì)胞以釋放染色質(zhì)，同時(shí)保持蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的完整性。
6. 染色質(zhì)的剪切：通過(guò)超聲或酶消化將染色質(zhì)剪切成適當(dāng)大小的片段，通常在200-1000 bp之間。
7. 免疫沉淀：使用特定抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，然后利用蛋白A/G磁珠沉淀復(fù)合物。
8. 洗滌和洗脫：洗滌沉淀物以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和DNA，然后洗脫目標(biāo)蛋白-DNA復(fù)合物。
9. 逆轉(zhuǎn)交聯(lián)：使用蛋白酶K處理樣品以逆轉(zhuǎn)交聯(lián)，釋放DNA。
10. DNA的純化和分析：純化DNA并使用qPCR、芯片或測(cè)序技術(shù)（如ChIP-seq）進(jìn)行分析。
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標(biāo)簽： 免疫沉淀 支原體