LAMP法,即環(huán)介導等溫擴增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification),是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。它由日本學者Notomi于2000年開發(fā)。LAMP法檢測有以下特性:
快速高效:LAMP技術(shù)可以在1小時內(nèi)把幾拷貝的目的序列迅速擴增到10^9^~10^10^拷貝,擴增效率高。
簡便性:LAMP技術(shù)不需要進行模板的預變性,減少了PCR技術(shù)升降溫帶來的影響以及對昂貴、精密實驗儀器的要求,同時擴增效率高,可以在較短時間內(nèi)完成檢測。
LAMP法因其快速、高效、特異、靈敏和經(jīng)濟等優(yōu)點,已經(jīng)應用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測等領域,并且還將廣泛應用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測、食源安全等領域,具有更為廣闊的發(fā)展應用前景。
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支原體預防的策略主要包括以下幾個方面:
1. 控制污染源:通過定期檢測和去除細胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在,從而獲得準確有效的實驗數(shù)據(jù)。
2. 改善無菌操作技術(shù):通過提高實驗人員的操作技術(shù)和意識,避免在細胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。
3.使用無菌設備和耗材:使用無菌的細胞培養(yǎng)設備和耗材,如無菌培養(yǎng)基、血清等,減少支原體污染的風險。
4. 定期消毒和清潔:對實驗室環(huán)境進行定期的消毒和清潔,包括工作臺、培養(yǎng)箱等,以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預防性試劑:使用專門針對支原體的預防性試劑,如加入細胞培養(yǎng)基中的預防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預防和細胞培養(yǎng)箱水盤預防等,以預防支原體污染。
杭州細胞支原體去除多少錢支原體去除的實驗步驟?
細胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能由以下原因引起:
1. 擴增產(chǎn)物污染:PCR擴增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理,極微量的污染就可能導致假陽性結(jié)果。
2. 引物設計不當:引物設計不夠特異性,可能會與非目標序列發(fā)生反應,導致非特異性擴增。
3. 試劑質(zhì)量問題:使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質(zhì)量不佳,可能引起非特異性擴增或假陽性結(jié)果。
4. 操作技術(shù)問題:實驗操作不規(guī)范,如混合樣本、標簽錯誤或樣本標識不清等,可能導致假陽性結(jié)果。
5. PCR反應條件設置不當:不恰當?shù)腜CR反應條件,如溫度和時間選擇不當,可能導致非特異性擴增。
6. DNA污染:PCR環(huán)境中的DNA污染會干擾結(jié)果,導致假陽性
支原體檢測實驗方法需要考慮以下幾個關鍵點:
1. 樣本的采集與處理:確保樣本的采集和處理過程符合無菌操作規(guī)范,避免交叉污染。
2. 實驗操作的標準化:制定詳細的實驗操作流程,包括樣本接種、培養(yǎng)條件、觀察時間點等,以保證實驗的可重復性和準確性。
3. 使用適當?shù)呐囵B(yǎng)基:根據(jù)支原體的特性選擇合適的培養(yǎng)基,如支原體肉湯4. 培養(yǎng)基、精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,并確保培養(yǎng)基的靈敏度和特異性。
5. 設置對照組:實驗中應包括陽性對照和陰性對照,以驗證實驗方法的有效性和排除假陽性或假陰性結(jié)果。
支原體的檢測方法有哪些?
細胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點:
1. 無細胞壁結(jié)構(gòu):支原體是沒有細胞壁的微生物,這使得許多作用于細胞壁的抗*素對支原體無效。
2. 微小體積:支原體體積小,能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜,例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。
3. 隱匿性:支原體污染初期很難被察覺,它們在普通光學顯微鏡下幾乎不可見,因此細胞被支原體污染后,前期很難被發(fā)現(xiàn)。
4. 傳播途徑多樣:支原體可以通過細胞培養(yǎng)物、細胞懸液、細胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。
5. 污染源 :支原體污染源包括細胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚,以及細胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。
6. 環(huán)境因素:實驗室環(huán)境、試驗臺、超凈臺、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染,引起細胞的污染。
7. 抗*素耐藥性:支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性,使得治*效果變差。
8. 檢測和清理方法的局限性:一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效,導致難以徹底清理支原體
細胞培養(yǎng)中支原體污染對實驗結(jié)果有什么影響?北京細胞培養(yǎng)支原體預防試劑多少錢
細胞培養(yǎng)支原體污染怎么檢測?上海細胞支原體預防現(xiàn)貨
支原體去除的實驗步驟通常包括以下幾個階段:
1. 支原體檢測:在進行去除之前,首先要確認細胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染。這可以通過多種方法實現(xiàn),如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法。
2. 選擇合適的去除試劑:一旦確認存在支原體污染,需要選擇一種有效的去除試劑。
3. 去除試劑的添加:根據(jù)去除試劑的說明書,將試劑添加到受污染的細胞培養(yǎng)基中。通常,這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細胞培養(yǎng)液中。
4. 孵育:添加去除試劑后,將細胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時間和條件(如溫度、CO2濃度)應根據(jù)試劑的推薦進行調(diào)整。
5. 監(jiān)測去除效果:在孵育過程中,定期監(jiān)測細胞的狀態(tài)和去除效果。這可能包括觀察細胞形態(tài)、生長速率的變化,以及通過顯微鏡檢查是否有支原體存在的跡象。
6. 后續(xù)檢測:去除過程完成后,再次使用支原體檢測方法確認污染是否已被成功。
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