細胞凍存：細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活的開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。原理：細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞培養(yǎng)技術(shù)中細胞進行保種并長期保存的常用方法。廣州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家

細胞凍存液的操作步驟：1.配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細胞培養(yǎng)液;2.取對數(shù)成長期的體細胞，除去舊細胞培養(yǎng)液，用PBS清理。3.除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長發(fā)育的體細胞消化吸收出來;4.抽濾1000rpm，5min;5.除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細胞培養(yǎng)液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱，記數(shù)，調(diào)整凍存液中體細胞的較后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.將體細胞分裝進凍存管中，每管1～1.5ml;7.在凍存管上標出體細胞的名字，凍存時間及作業(yè)者;8.凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當(dāng)溫度達-25℃下列時，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時，則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細胞的凍存管放進-20℃電冰箱2h，隨后放進-70℃電冰箱中留宿，取下凍存管，移進液氮容器內(nèi)。廣州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能：傳統(tǒng)的凍存液，一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。

新常態(tài)下細胞凍存指南：細胞凍存技術(shù)其重要意義無論怎么估計也不為過。有了高效的凍存復(fù)蘇技術(shù)，我們能把珍貴的樣本保存起來建立各種生物樣本庫，能夠建立骨髓庫、臍血庫挽救生命，當(dāng)然也能在**發(fā)生的時候把樣本凍存。細胞凍存技術(shù)和我們的日常生活也息息相關(guān)。例如IVF 體外受精技術(shù)，精子庫與胚胎的冷凍，以及臍帶血的凍存，都離不細胞開凍存技術(shù)。缺點是血清批間差不穩(wěn)定，導(dǎo)致的每次凍存復(fù)蘇的效果無法保證，同時也無法應(yīng)用于多種細胞類型，尤其是嬌貴的干細胞，血清成分復(fù)雜可能會導(dǎo)致干細胞的分化，不利于后期的實驗。因此大多數(shù)研究者喜歡商品化的無血清細胞凍存液，商品化的無血清凍存液經(jīng)過了廠家對多種細胞品系的優(yōu)化，效果可靠，操作簡便。不同的細胞，適合的凍存液也不同，需要根據(jù)細胞的類型進行選擇。

細胞凍存液常見問題：1.從繁衍期到產(chǎn)生高密度的單層細胞之前的塑造體細胞都能夠用以凍存，但較好是為多數(shù)成長期體細胞。在凍存前一日較好是換一次細胞培養(yǎng)液;2.將凍存管放進液氮容器或從這當(dāng)中取下時，要搞好安全防護工作中，以防凍壞;3.凍存和再生較好用新配置的細胞培養(yǎng)液。細胞凍存的基本原理：細胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與，而這些蛋白酶在環(huán)境溫度低于-70℃時會集體不工作，低溫貯藏的目的是通過較低溫使細胞代謝活動近乎停止。細胞因此進入休眠狀態(tài)，使細胞“不會老”，所以可以長期保存。因為凍融過程對所有細胞和組織都是有一定傷害的，因此，需要開發(fā)出有效的技術(shù)來防止細胞死亡和損傷。無血清快速細胞凍存液：能夠滿足大部分體外培養(yǎng)細胞的凍存需求。

無血清細胞凍存液復(fù)蘇細胞實驗步驟：1.從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1 ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9 ml該細胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3.離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm，4℃，3~5 min），移去上清液。4.清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：通用型，適用于凍存各種細胞系、原代細胞。廣州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家

無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：無需液氮，-80℃冰箱長期凍存。廣州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家

細胞凍存秘籍：低溫儲存始終保持儲存溫度低于-130°C。細胞可以在更高的溫度下存活，但生存力通常會隨著時間的推移而降低。理想的儲存容器是液氮罐，其中細胞或者被浸沒在液氮中，或者被懸浮在液氮上方的蒸汽相中。出于安全原因（以下＃6），推薦氣相儲存。要維護液氮中儲存的細胞需要記住以下幾點：A. 確保標簽系統(tǒng)適用于（長久）低溫儲存。B. 保持良好記錄，包括細胞儲存位置，生長特點和操作記錄。C. 請頻繁檢查液氮罐的狀態(tài)（較好每天或至少每周一次）。有多種商用警報系統(tǒng)可用于持續(xù)監(jiān)控其狀態(tài)。珍貴細胞應(yīng)至少存放在兩個不同的地點。廣州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家