鼠尾膠原蛋白:膠原蛋白(Collagen)是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,但在皮膚、肌腱、骨骼中分布較為普遍。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型,I型膠原蛋白(Collagen, Type I)結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體,在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu),被普遍用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì),如肝細(xì)胞、纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié)、雪旺氏細(xì)胞等。另外,I型膠原蛋白在細(xì)胞生長、分化、遷移和組織形態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用。膠原蛋白I(rat tail tendon collagen type I)根據(jù)Birkedal-Hansen方法,經(jīng)過醋酸(HAc)抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,可用于制備三維膠,模擬細(xì)胞真實(shí)的生長環(huán)境;也可以用于包被組織培養(yǎng)皿表面,提高細(xì)胞表面粘附性,比如培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞、肝細(xì)胞等原代細(xì)胞。鼠尾膠原醋酸溶解:在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。天津鼠尾膠原單價(jià)
膠原蛋白的功效:1.膠原蛋白可以作為一種補(bǔ)鈣食品,膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運(yùn)輸鈣到骨細(xì)胞的運(yùn)載工具,骨細(xì)胞中的骨膠原是羥基磷灰石的粘合劑,它與羥基磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體。因此,只要攝入足夠的膠原蛋白,就能保證正常機(jī)體鈣質(zhì)的攝入量,膠原蛋白可制成補(bǔ)鈣的保健食品。2.膠原蛋白在人體運(yùn)動鍛煉的過程中,可以促使身體消耗大量脂肪達(dá)到的效果。但需要注意的是膠原蛋白本身是沒有作用的,它只能在運(yùn)動呢鍛煉是增加脂肪的消耗量。3.膠原蛋白是身體免疫作用中負(fù)責(zé)重要功能的阿米巴細(xì)胞清掃異物的感知器,因此對預(yù)防疾病很有幫助??商岣呙庖邫C(jī)能、克制細(xì)胞、活化細(xì)胞機(jī)能、活化筋骨、治好關(guān)節(jié)炎及酸痛。重慶鼠尾膠原哪家便宜不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出。
鼠尾Ⅰ型膠原:組裝液的配置:1.50 mmol/L甘氨酸+200 mmol/L氯化鉀 100 mL,用1 mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中,倒入0.5 mL自組裝液,室溫放置20 min。予自組裝液自組裝24 h。吸取0.05%戊二醛2 mL至小培養(yǎng)皿中,將自組裝24 h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進(jìn)行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10 mmol/L 二水氯化鈣+150 mmol/L氯化鈉+50 mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,滴入聚丙烯(PAA)至濃度350 μg/mL;滴加1 mol/L的氯化氫,調(diào)節(jié)酸堿度至7.4,然后緩慢滴入25 mL磷液(6 mmol/L磷酸氫二鈉),約16滴/min。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,并且制作簡便,成本低廉。
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式,為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞,培養(yǎng)7天時(shí)進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接;同一細(xì)胞任意兩點(diǎn)纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛清理功能的影響提供了良好的方法和途徑。膠原蛋白(Collagen)是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分。
鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。需要的溶液 ( 均需要 無菌 、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測試)。在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,切勿凍存,有效期一年。北京正規(guī)鼠尾膠原哪家好
制備鼠尾膠原:按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液。天津鼠尾膠原單價(jià)
鼠尾膠原蛋白I型,用那一種膠原酶可以溶解:1.將膠原加入到0.1M 的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。5.從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,這時(shí)候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。天津鼠尾膠原單價(jià)