miRNA是一類內(nèi)源性的約22個核苷酸的非編碼RNA分子,可參與轉(zhuǎn)錄后的基因調(diào)控。在細(xì)胞的分化和發(fā)育,細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和對傳染的應(yīng)答等生物學(xué)過程中,miRNA發(fā)揮了重要作用。成熟的miRNA主要通過翻譯壓制來調(diào)控內(nèi)源性基因的表達(dá)。miRNA的應(yīng)用有miRNA模擬物和壓制劑。miRNA模擬物是化學(xué)合成的雙鏈RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,模擬成熟的內(nèi)源性miRNA分子;miRNA壓制劑是單鏈經(jīng)過修飾的RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,特異性的壓制miRNA的功能。miRNA模擬物和壓制劑可以用于研究單個miRNA錯誤調(diào)節(jié)所造成的生物學(xué)影響,也能用于確定某個miRNA分子的特異性靶標(biāo)基因。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)miR-143可調(diào)控KRAS原病基因,為病癥的醫(yī)治提供了新的靶點(diǎn)和醫(yī)治方法。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料。南京RNA提取試劑廠家直銷
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時(shí)能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。廈門正規(guī)RNA提取試劑供應(yīng)商血漿/血清RNA提取試劑盒:利用吸附柱法從血清、血漿樣品中簡單快捷提取高純度高質(zhì)量的miRNA。
科學(xué)家曾經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室里就成功地讓RNA實(shí)現(xiàn)了自我復(fù)制的功能。不僅如此,還有科學(xué)家構(gòu)建了一種DNA-RNA雜交基因組的大腸桿菌。這個實(shí)驗(yàn)證明,即使有DNA-RNA的雜交鏈的中間態(tài),生物也不至于會死亡。所以,RNA較早可能給就是生物的遺傳物質(zhì),只是后來逐步被替代了。當(dāng)然,還有一些次要的原因,比如,我們都知道DNA是在細(xì)胞核當(dāng)中的,完成生命活動這些步驟其實(shí)都在細(xì)胞核外進(jìn)行,因此這樣其實(shí)更加安全。而如果是RNA,那就沒有必要存在細(xì)胞核了,但是當(dāng)細(xì)胞損失時(shí),就很容易出現(xiàn)問題。因此,DNA后來逐漸取代了RNA作為生物的遺傳物質(zhì)。但這并不是說RNA不能夠作為遺傳物質(zhì),相反它是可以作為遺傳物質(zhì)而存在的。
提取RNA的詳細(xì)步驟:首先,將研缽晾干夠,倒入1/3體積的液氮,加入0.2g均質(zhì)的植物材料,充分研磨后轉(zhuǎn)入一個含有300微升GMT的1.5ml的離心管中,搖勻。然后,加入30微升2mol/lNaAc進(jìn)行搖勻,加入300微升酸酚搖勻,加入100微升的氯仿?lián)u勻。然后,在四攝氏度12000r/min下離心二十分鐘,吸取上清液的3/4,加入等體積的異丙醇,于冰上放置十五分鐘。然后,在四攝氏度12000r/min下離心十分鐘,將沉淀懸浮于含100微升的4mol/lLiCl小試管中,于-20攝氏度下放置過夜。然后,在4攝氏度13000r/min下離心10-15min,將沉淀溶于0.4mlDEPC處理水中,加入1/2體積氯仿和1/2體積酸酚,搖勻,進(jìn)行抽提,在4攝氏度13000r/min下離心五分鐘。將上清液中加入等體積的氯仿?lián)u勻,進(jìn)行抽提,在四攝氏度13000r/min下離心五分鐘,上清液中加入1/10體積3mol/lNaAc和兩倍體積的午睡乙醇與-20攝氏度放置一小時(shí)。RNA提取試劑注意事項(xiàng):使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。
昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:RNA完整性的電泳檢測:如果需要做Northern雜交,強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳,因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子。注意:大部分昆蟲的28SRNA被切割成兩個小的片段,彼此用氫鍵相連,所以在甲醛變性膠中,沒有28S帶出現(xiàn)。RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定:將5~10μLRNA溶于TE緩沖液中(pH7.5~8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1OD260的RNA=40μg/mL),進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。RNA純度測定:無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8~2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染,但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。總RNA提取試劑,適用于動植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提,可有效防止RNA在提取過程中的降解。長沙RNA提取試劑價(jià)格
植物花總RNA提取試劑盒:特殊的提取緩沖液保證特殊植物材料中的總RNA充分溶解。南京RNA提取試劑廠家直銷
組成性非編碼RNA。tRNA是具有復(fù)雜的倒“L”型的多功能小分子,他的主要功能是活化專一的氨基酸并攜帶氨基酸參與蛋白質(zhì)生物合成。隨著科技進(jìn)步,人們可以設(shè)計(jì)生產(chǎn)出一種tRNA類似物,創(chuàng)造了新的生物技術(shù)的應(yīng)用。(1)tRNA類似物??衫梅翘烊坏膖RNA類似物作為體內(nèi)應(yīng)用藥物,特別是針對病原體的蛋白液合成系統(tǒng)。(2)tRNA介導(dǎo)蛋白質(zhì)工程(TRAMPE)。傳統(tǒng)的遺傳工程由于只能操作蛋白質(zhì)中常見的20種天然氨基酸而受到限制。而tRNA介導(dǎo)的蛋白質(zhì)工程允許拓展遺傳密碼,可以將人為設(shè)計(jì)的非天然氨基酸選擇性地?fù)饺氲鞍踪|(zhì)。在蛋白質(zhì)工程中借助于校正tRNA定點(diǎn)摻入非天然氨基酸可以提供蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息,改進(jìn)蛋白質(zhì)檢測與分離的方法,甚至賦予蛋白質(zhì)某些新的特性。隨著生物技術(shù)的發(fā)展和完善,tRNA介導(dǎo)蛋白質(zhì)工程將不僅在蛋白質(zhì)工程中發(fā)揮潛能,而且在研制新型生物材料和疾病診斷及藥物醫(yī)治方面起到推動作用。南京RNA提取試劑廠家直銷