外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等通過離心篩選初步去除體液中的細(xì)胞成分和細(xì)胞碎片，制成體液樣本備用。杭州外泌體提取試劑平均價格

外泌體因諾貝爾醫(yī)學(xué)獎而被眾人知曉，也因其作為生命信息傳遞者，在體液中普遍存在及易獲得性等特點(diǎn)被譽(yù)為液體活檢"新貴"，成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點(diǎn)，尤其是在一些病癥研究領(lǐng)域[。外泌體作為細(xì)胞間通信載體的作用現(xiàn)在已被普遍接受。外泌體包含胞質(zhì)環(huán)境中富含的DNA，RNA，蛋白質(zhì)和其它分析物，研究表明，外泌體中的運(yùn)轉(zhuǎn)RNA和蛋白質(zhì)與一些病癥的生長密切相關(guān)，有望作為診斷標(biāo)志物。研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個外泌體的重要調(diào)控因子，與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，Vps4A基因的表達(dá)下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān)。通過microRNA高通量測序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA，與肝病的發(fā)生密切相關(guān)。深圳外泌體提取試劑平均價格由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價值。

有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%，因而認(rèn)為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標(biāo)志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì)，進(jìn)一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導(dǎo)途徑以促進(jìn)一些病癥的發(fā)生的發(fā)展，因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標(biāo)記物。外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷：近年來眾多文獻(xiàn)報道，肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進(jìn)肺病的發(fā)生的發(fā)展，是早期診斷肺病的有效途徑。

外泌體鑒定：外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物，多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；細(xì)胞質(zhì)蛋白，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）；使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法。

外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體，內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間，其中包含RNA、蛋白質(zhì)、microRNA、DN**段等多種物質(zhì)，存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史，雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”，所以才被排出來，但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞。如今，研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。專利申請利用分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來進(jìn)行體外培養(yǎng)。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮，使外泌體懸浮于液體上層。濟(jì)南正規(guī)外泌體提取試劑單價

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外泌體（Exosomes）是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs），其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同時也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻，置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定。來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中杭州外泌體提取試劑平均價格