總RNA的定義：總RNA=mRNA+tRNA+rRNA，即：總RNA就是指mRNA、tRNA、rRNA的總和。這是在還沒有發(fā)現(xiàn)lncRNA等microRNA的時(shí)候的概念。但是卻被各大公司默認(rèn)的概念，一直延續(xù)至今。所以各位可以去各大公司的網(wǎng)站，看一看總RNA提取試劑盒案例提供的RNA電泳圖，只有表示總RNA的2條帶——28s和18s；表示microRNA的5s帶，要不沒有，要不很弱。那么mRNA在哪里呢？從RNA電泳圖上能不能看到呢？真正成熟的mRNA，主要集中在28s和18s之間和上下的熒光背景（一般每條基因mRNA量很少，所以，整體一般看不到明顯帶，只表現(xiàn)為28s和18s中間和上下的連續(xù)的涂抹帶）。拭子RNA提取試劑的選擇？洗脫液洗脫能力好，核酸的提取得率就高。長沙正規(guī)RNA提取試劑直銷廠家

動(dòng)物組織總RNA提取：1、盡量選取新鮮的組織，如果不是新鮮的（較好在三個(gè)月之內(nèi)-80℃冰箱或者在液氮中凍存的。在剪取組織時(shí)，不要拿到室溫直接剪取，一定要放到冰盒上，盡量避免反復(fù)凍融。2、用干凈的剪刀鑷子剪取一小塊組織，剪取樣本時(shí)盡量剪組織中心的部位，或者先將大塊的組織先從中間切開，然后再在新鮮切口的位置剪取樣本。取下的組織要充分的剪碎，將剪碎的組織放到無RNA酶的EP管中，加入裂解液，剪碎的組織要充分接觸裂解液，準(zhǔn)備勻漿。3、正常組織選取綠豆粒大小（30~60mg）的組織進(jìn)行勻漿，如果組織中含有大量的蛋白、脂肪或者是緊密的纖維組織比如肝臟等，適當(dāng)增減剪取組織的量（可選10~20mg）。4、如果提取的是魚肌肉，蝦肉，海蜇等含水分較多的組織時(shí)則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量用量（推薦100~200mg）。5、條件允許的情況下，動(dòng)物組織使用高通道組織勻漿機(jī)勻漿后即可直接進(jìn)行提取步驟，如沒有該設(shè)備。6、較后提取后得到的RNA一定要立即放到冰盒上，以減少RNA的降解。廈門正規(guī)RNA提取試劑植物RNA提取試劑：操作簡單，提取迅速，溶液毒性小，實(shí)驗(yàn)安全。

動(dòng)物細(xì)胞RNA提?。?、懸浮細(xì)胞：可直接離心后棄掉培養(yǎng)基，用無菌PBS清洗1~2遍后，再用適量PBS懸浮起來，然后再加入裂解液進(jìn)行裂解。千萬不要完全棄掉液體后，往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液，這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè)，從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸，從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底，降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞：棄掉培養(yǎng)基后，用PBS洗1~2次，然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿，把細(xì)胞吹下來，轉(zhuǎn)移到無RNA酶的EP管中，加裂解液進(jìn)行提取。3、貼壁細(xì)胞：需要先用胰酶消化，然后收集到無RNA酶的EP管中，離心去其上清，用PBS洗1~2次，去除多余的胰酶，以適量PBS重懸后繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。

RNA提取試劑的選擇：選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí)，操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對(duì)于動(dòng)物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取，Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市，進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng)，無需苯酚氯仿抽提等步驟，簡單快捷。組織或細(xì)胞裂解后，提取操作光需20分鐘便可完成細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn)：方便快捷的離心柱操作方式。

RNA提取關(guān)鍵點(diǎn)：RNA的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無數(shù)人頭疼的問題，較佳方法是保證樣品完全裂解，但相同的裂解方案換了一個(gè)樣本可能就沒轍了。為了提高裂解效果，可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟（研磨珠破碎）匹配，或者在裂解液上游加入酶裂解步驟（如蛋白酶K、溶菌酶等）。BIOG血液RNA快速提取試劑盒是公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)在綜合比較了國外同類較好產(chǎn)品的基礎(chǔ)上反復(fù)研制優(yōu)化而成，專門用于血液RNA的快速提取純化。本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液配方，可直接從新鮮、冷凍或陳舊的全血中提取高質(zhì)量的RNA，操作簡便快速，只需15分鐘即可完成血液RNA提取。RNA提取得率較高，可在200μL全血中提取5μg左右RNA。BIOG血液RNA快速提取試劑盒采用了較新的較好離子膜，裂解液和洗脫液經(jīng)過多次優(yōu)化，有效地去除了蛋白、色素、脂類等雜質(zhì)污染，特別適用于血液包括細(xì)菌、病菌等傳染的分子檢測。RNA提取試劑注意事項(xiàng)：有機(jī)相用異丙醇沉淀可回收蛋白。青島正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦

血漿/血清RNA提取試劑盒：普通植物總ＲＮＡ提取試劑盒：采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱。長沙正規(guī)RNA提取試劑直銷廠家

細(xì)胞RNA提取的方法：實(shí)驗(yàn)提取步驟：標(biāo)準(zhǔn)Trizol提取步驟為液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細(xì)胞培養(yǎng)皿置于冰上，加入Trizol裂解5-10分鐘，用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進(jìn)口EP管中。加入1/5體積的氯仿，上下混勻液體，4度靜置10-15分鐘。（氯仿為有機(jī)溶劑，有效的使有機(jī)相和無機(jī)相迅速分離。有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合，從而使得蛋白和RNA脫離，RNA進(jìn)入水相）。4度離心15分鐘，一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層，RNA在上清里，從離心機(jī)輕輕拿出EP管，以免管內(nèi)物質(zhì)震蕩導(dǎo)致下層沉淀激起。吸取上清的時(shí)候一定要?jiǎng)幼鬏p柔，切忌吸取太多，一般吸到400-500ul，避免吸到下層沉淀，將液體置于新的EP管中。加入等體積異丙醇，4度靜置10min，然后12000rpm離心10min。長沙正規(guī)RNA提取試劑直銷廠家