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酵母RNA的提取方法:稀堿法是屬化學(xué)破壁法,其方法是在一定堿濃度下,使構(gòu)成細(xì)胞壁的蛋白質(zhì)、脂肪及糖的化合物得到水解,從而破壞細(xì)胞壁,此法對(duì)堿的濃度及提取溫度要求比較嚴(yán)格,堿的濃度不可過濃,應(yīng)控制在1%,并且對(duì)提取溫度也有一定的要求,提取時(shí)間短。因?yàn)樵谶^分劇烈的條件下,容易使核糖核酸分子內(nèi)的酯鍵斷裂,使核糖核酸降解而影響收得率。酵母菌作為重要的模式生物,是遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究材料。由于酵母菌的細(xì)胞壁成分復(fù)雜,且較原核生物厚,難于破碎,因此酵母菌總RNA的抽提純化要比原核生物總RNA的抽提純化困難的多。如何有效地破碎細(xì)胞壁并保證RNA的完整性,是獲得高質(zhì)量酵母菌總RNA的關(guān)鍵問題??俁NA的提取方法還有很多,如Trizol法、異硫氰酸胍法、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法、尿素法、十二烷基硫酸鈉(SDS)法、熱硼酸鹽法等,這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn),不同的方法適用于不同類型的材料。RNA提取試劑注意事項(xiàng):需自備氯仿,異丙醇,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。廣州正規(guī)RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍普遍,可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會(huì)分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相,RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等。廣州RNA提取試劑廠家供應(yīng)RNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無數(shù)人頭疼的問題。
RNA提?。褐饕噭㏕rizol是一種新型總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶。1.Trizol試劑含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。2.RNase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉,注重配帶手套,樣品盡可能蓋嚴(yán)。3.細(xì)胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會(huì)降低較后得率,因?yàn)橐徊糠諶NA會(huì)殘留在未裂解的細(xì)胞中。細(xì)胞裂解之后要看不見顆粒狀物質(zhì)(結(jié)締組織和骨除外)。在清洗和裂解細(xì)胞時(shí)較好在低溫下操作,防止在操作過程中釋放的內(nèi)源RNase降解了RNA。4.酵母和一些細(xì)菌由于細(xì)胞壁的特別結(jié)構(gòu),可以加入Trizol試劑同時(shí)加入無RNase的玻璃珠并劇烈振蕩,使細(xì)胞裂解充分。2-8℃避光保存一年。
石蠟包埋組織RNA快速提取試劑盒(離心柱型):原理簡(jiǎn)介:改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA(RNA)從硅基質(zhì)膜上洗脫。試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。3、獨(dú)有的MRL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過程,提取RNA純度更高植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn):無需氯化銫梯度離心,無需氯化鋰或乙醇沉淀。
超快速多糖多酚植物RNA提取試劑盒優(yōu)勢(shì):1、、無DNA污染可直接用于熒光定量PCR:目前市面上的試劑盒大多提出的RNA會(huì)出現(xiàn)DNA污染其結(jié)果嚴(yán)重影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),特別是非常靈敏的熒光定量PCR的實(shí)驗(yàn)。一些市面上單獨(dú)賣的去DNA污染的試劑,效果不穩(wěn)定,去除DNA污染不徹底。本產(chǎn)品操作簡(jiǎn)單,去除DNA徹底,得到的RNA樣品可直接用于熒光定量PCR,反轉(zhuǎn)錄等各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開發(fā)了糖類清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。3、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級(jí)代謝物豐富的植物樣本難題。拭子RNA提取試劑的選擇?離心柱的硅膠膜RNA吸附性能好、裂解液細(xì)胞裂解能力強(qiáng)。石家莊RNA提取試劑哪里買
他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度。廣州正規(guī)RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨
拭子RNA提取試劑的選擇?操作簡(jiǎn)便性。操作簡(jiǎn)便性也是拭子RNA提取試劑選擇的一個(gè)重要因素。操作過于復(fù)雜,不光費(fèi)時(shí)費(fèi)力,還容易導(dǎo)致樣本間的交叉污染,也容易損失樣本。特別是用于臨床檢測(cè)或樣本量較多情況下的檢測(cè),操作復(fù)雜如果導(dǎo)致交叉污染會(huì)引起誤診,還會(huì)影響出檢測(cè)報(bào)告的時(shí)間。因而,選用操作簡(jiǎn)便、流暢的提取試劑盒非常重要。就我們?cè)?jīng)用過的以上三種提取試劑盒來說,Q公司的拭子RNA提取試劑盒提取過程大約25min,從樣本處理開始需要10個(gè)步驟;T公司拭子RNA提取試劑盒整個(gè)提取過程需要1個(gè)多小時(shí),從樣本開始處理10個(gè)步驟;B公司的Biog拭子RNA提取試劑盒提取過程大約20min,從樣本開始處理7個(gè)步驟,B公司的拭子RNA提取試劑盒在操作簡(jiǎn)便性上具有一定優(yōu)勢(shì),更適合于較多樣本的檢測(cè)。據(jù)了解,該產(chǎn)品已通過藥監(jiān)局備案,也更適合臨床樣本的檢測(cè)。廣州正規(guī)RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨
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