鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱，真空冷凍干燥備用；(2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目；(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL，期間不斷攪拌，防止凍結(jié)成塊，得到膠原溶脹液；(4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50:I?100:1，在4°C，48?74小時酶解，期間間歇性攪拌。鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實驗室設備的內(nèi)部涂層。寧波鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境，使細胞在三維環(huán)境中生長。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法：1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應的培養(yǎng)器皿中。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。石家莊正規(guī)鼠尾膠原服務電話在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。

以鼠尾膠原為支架的類似物的建立：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞，制備鼠尾膠原，將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細胞溶液在適當?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細胞生長狀態(tài)良好，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物，該模型是進行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復合皮的關鍵與基礎；②成纖維細胞膠原凝膠復合物有著良好的生物學特性，它是研究成纖維細胞與細胞外基質(zhì)之間以及細胞之間相互作用的良好模型。

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理。

鼠尾膠原實驗應用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞，細胞角蛋白18表達陽性，免疫組織化學結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。溫州鼠尾膠原報價

凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至目。寧波鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察：果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色；礦化2d后，膠體的顏色逐漸加深至乳白色；礦化6d后，隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內(nèi)部，膠體顏色加深至純白色，并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體，予鑷子夾起，其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落。TEM表征顯示：礦化2d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部，膠原纖維部分礦化，沿著膠原纖維生長，忖度變深；礦化6d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失，膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體，嵌入膠原纖維縱向生長。當鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時，由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù)，膠原纖維呈現(xiàn)黑色，選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征。寧波鼠尾膠原廠家

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