糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:盡可能選取小塊新鮮組織及時固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前決不能用水或生理鹽水等浸洗。應避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能較好地保存糖原,但有使糖原流動到細胞一側(cè)的現(xiàn)象,多數(shù)人認為是由于固定劑把細胞內(nèi)的糖原推向固定劑對組織浸透的方向而造成。其他組織應用中性福爾馬林固定為佳。組織在4℃左右溫度內(nèi)固定與保存,是針對糖的性質(zhì)和避免糖原溶于水而采取的相應措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此較好不單獨使用乙醇固定,以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳切取的材料應小而薄,便于固定液迅速滲入內(nèi)部。江蘇糖原染色試劑盒廠家供應
糖原染色試劑盒。含乙二醇基的多糖經(jīng)過碘酸氧化,產(chǎn)生醛基,與雪夫(Schiff)試劑中無色品紅結(jié)合,形成紫紅色沉淀物定位于含糖原的胞漿中。該反應稱為碘酸-雪夫(PAS)反應。(1)雪夫液配制:堿性品紅1g溶于200ml沸水中,冷卻60℃時過濾,加1mmol/L鹽酸20ml,再冷卻至25℃左右,加偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,置暗處24h,無色即可放冰箱中保存,呈微紅色,則加活性炭1~2g,吸附過濾使成無色液體,放冰箱中保存。若溶液變紅,即不能再用。(2)10g/L過碘酸水溶液:過碘酸(HIO4·2H2O)1g,加蒸餾水至10ml。溶解后蓋緊放冰箱備用,一般可用3個月,變黃則失效。山東品質(zhì)好的糖原染色試劑盒平均價格素染色液100mlHE染色屬于常規(guī)切片HE染色的明礬蘇木素的一種。
PAS染色的臨床意義①幫助鑒別不典型巨核細胞和霍奇金細胞或Reed-Sternberg細胞,前者呈強陽性反應,后者呈弱陽性或陰性反應。②幫助鑒別戈謝細胞和尼曼-匹克細胞,前者呈強陽性反應,后者呈弱陽性反應,且空泡中心為陰性反應。③幫助鑒別白血病細胞和腺骨髓轉(zhuǎn)移的腺細胞,后者呈強陽性反應,陽性反應物質(zhì)為紅色細顆粒狀或粗顆粒狀,有時呈紅色塊狀。白細胞系統(tǒng):急性淋巴細胞白血病時白血病性原始淋巴細胞的陽性反應物質(zhì)為紅色粗顆粒狀或紅色塊狀,底色不紅;急性粒細胞白血病時,白血病性原始粒細胞的陽性反應物質(zhì)呈均勻分布的紅色細顆粒狀或呈均勻紅色;急性單核細胞白血病時,白血病性原始單核細胞的陽性反應物質(zhì)呈紅色細顆粒狀,彌散分布,有時在胞漿的邊緣處顆粒較粗大。
糖原染色:細胞內(nèi)含1,2-乙二醇基的多糖類經(jīng)過碘酸氧化后產(chǎn)生醛基,與特殊染液作用,使無色品紅變成紅色化合物,沉淀于胞質(zhì)之中。紅色的深淺與細胞中起反應的1,2-乙二醇基的量呈正比。用于不典型巨核細胞與李—斯細胞的鑒別,前者PAS反應為強陽性,后者為陰性或弱陽性;用于高雪細胞和尼曼一匹克細胞的鑒別,前者PAS反應為強陽性,而后者反應為陰性或弱性。正常值正常情況下,紅細胞系統(tǒng)的原、幼紅細胞和成熟紅細胞;粒細胞系統(tǒng)的原粒細胞、原單核細胞和大多數(shù)淋巴細胞為陰性反應。自早幼粒階段以后的粒細胞和幼單核細胞可呈弱陽性反應。糖原染色顯示在肝或心肌細胞內(nèi)有大量糖原存在即可確診.。
PAS技術(shù)是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標冸唾液的考慮,不主張應用唾液。所以網(wǎng)狀纖維的組織化學染色,在臨床病理診斷上占著相當重要的位置??梢赃x用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細胞。湖南咨詢糖原染色試劑盒廠家供應
冷凍切片染色效果不佳,成熟時間2個月,染色時間一般15-20分鐘。江蘇糖原染色試劑盒廠家供應
注意事項:染色前:①切出的石蠟切片要好,不能有皺褶或者刀痕,切片不能太厚。②撈片時,較好一張玻片撈一個組織,組織較好位于玻片的中間,美觀的同時也利于脫蠟(有時二甲苯的液面低于組織片的時候,達不到脫蠟的目的)。③石蠟切片脫蠟到水時,一定要注意組織切片脫蠟務必要徹底(脫蠟時間不能太少)以使脫蠟后的組織達到真正的“干凈”。否則剩余的未脫干凈的石蠟粘附在組織表面,在染色時染色液未能充分與組織接觸,較終導致染色效果不佳,甚至染不上顏色。④在染色過程中較好不要在玻片上貼標簽紙,以避免脫蠟時把標簽紙也浸沒,致使標簽紙上的膠黏到玻片上,造成染色不佳。江蘇糖原染色試劑盒廠家供應