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DNA和RNA的鑒別染色:利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA。吖啶橙作為一種熒光染料已被用于染色固定,非固定細(xì)胞核酸,或作溶酶體的一種標(biāo)記。觀察死亡細(xì)胞熒光變色性變化以及區(qū)別分裂細(xì)胞和靜止細(xì)胞群體。雖然測(cè)定DNA和RNA含量時(shí)較難獲得好的重復(fù)性結(jié)果,但該方法已被許多實(shí)驗(yàn)室普遍采用。RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區(qū)別:溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇來(lái)沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來(lái)沉淀RNA。與DNA不同,RNA一般為單鏈長(zhǎng)分子,不形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。溫州成都RNA提取試劑
植物RNA快速提取試劑盒:是一種單相RNA快速提取試劑盒,可高效裂解堅(jiān)固的植物細(xì)胞并強(qiáng)烈壓制RNA酶活性。細(xì)胞破碎之后,植物多糖立即被PlantRNAtrip獨(dú)特的成分結(jié)合。離心抽提步驟將RNA與滅活的RNA酶、蛋白、基因組DNA污染分離,并清理植物多糖多酚以及次生代謝產(chǎn)物。在RNA沉淀之前加入PlantRNAAid清理植物多酚,并清理殘余的多糖。提取可在60分鐘內(nèi)完成,所提取的RNA純度極高,不含DNA和多糖和多酚污染,可用于構(gòu)建cDNA文庫(kù)、RT-PCR、Northern轉(zhuǎn)印分析、Poly(A)mRNA純化、體外翻譯、和RNA酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)。適于各種植物組織RNA提取,也特別適合富含糖原的動(dòng)物肝臟和肌肉組織提取高純度RNA。如果植物組織富含多酚和次生代謝產(chǎn)物,推薦使用PlantRNAExtractionkit(R1050)。溫州成都RNA提取試劑可以用260nm波長(zhǎng)分光測(cè)定RNA濃度,OD值為1相當(dāng)于大約40μg/ml的單鏈RNA。
石蠟包埋組織RNA快速提取試劑盒(離心柱型):原理簡(jiǎn)介:改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA(RNA)從硅基質(zhì)膜上洗脫。試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過(guò)程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過(guò)度干燥不易溶解問(wèn)題。3、獨(dú)有的MRL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過(guò)程,提取RNA純度更高。
總RNA的定義:總RNA=mRNA+tRNA+rRNA,即:總RNA就是指mRNA、tRNA、rRNA的總和。這是在還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)lncRNA等microRNA的時(shí)候的概念。但是卻被各大公司默認(rèn)的概念,一直延續(xù)至今。所以各位可以去各大公司的網(wǎng)站,看一看總RNA提取試劑盒案例提供的RNA電泳圖,只有表示總RNA的2條帶——28s和18s;表示microRNA的5s帶,要不沒(méi)有,要不很弱。那么mRNA在哪里呢?從RNA電泳圖上能不能看到呢?真正成熟的mRNA,主要集中在28s和18s之間和上下的熒光背景(一般每條基因mRNA量很少,所以,整體一般看不到明顯帶,只表現(xiàn)為28s和18s中間和上下的連續(xù)的涂抹帶)。RNA提取試劑注意事項(xiàng):盡量不要對(duì)著RNA樣品說(shuō)話,以防RNA酶污染。
細(xì)菌RNA快速提取試劑盒:該產(chǎn)品基于獨(dú)特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶,然后用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過(guò)一系列快速的去蛋白、漂洗的步驟將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNaseFreeH2O將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。該產(chǎn)品可在30min內(nèi)完成樣品RNA的提取,提取的總RNA完整性好,無(wú)蛋白和基因組DNA污染。注意事項(xiàng):初次使用前請(qǐng)先在漂洗液RW瓶加入指定量無(wú)水乙醇,加入后請(qǐng)及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大量清水或者生理鹽水沖洗。所有離心操作步驟,均可在室溫(15-25℃)下進(jìn)行。提取細(xì)菌RNA需先配制加了溶菌酶或者Lysostaphin的TE(10mMTris-HCl,1mMEDTA),TE中已加入溶菌酶或者Lysostaphin,濃度為1mg/mL。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。溫州成都RNA提取試劑
再采集樣本之后馬上加入 DNA/RNA Shield,可以快速降解掉 RNase 等蛋白物質(zhì)。溫州成都RNA提取試劑
細(xì)胞RNA提取的方法:實(shí)驗(yàn)提取步驟:標(biāo)準(zhǔn)Trizol提取步驟為液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細(xì)胞培養(yǎng)皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進(jìn)口EP管中。加入1/5體積的氯仿,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘。(氯仿為有機(jī)溶劑,有效的使有機(jī)相和無(wú)機(jī)相迅速分離。有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合,從而使得蛋白和RNA脫離,RNA進(jìn)入水相)。4度離心15分鐘,一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層,RNA在上清里,從離心機(jī)輕輕拿出EP管,以免管內(nèi)物質(zhì)震蕩導(dǎo)致下層沉淀激起。吸取上清的時(shí)候一定要?jiǎng)幼鬏p柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下層沉淀,將液體置于新的EP管中。加入等體積異丙醇,4度靜置10min,然后12000rpm離心10min。溫州成都RNA提取試劑