RNA組成結(jié)構(gòu):RNA和DNA一樣,也是由各種核苷酸通過3′,5′-磷酸二酯鍵連接構(gòu)成的多核苷酸鏈,但與DNA有一系列差異。1.在化學(xué)組成方面,RNA含核糖而不含脫氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是,每個(gè)tNA分子含有一個(gè)胸腺嘧啶,這是在RNA鏈合成后由尿嘧啶甲基化生的,此外,前面已提到,少數(shù)DNA含有少量核糖,但這些個(gè)別的例外并不能以此否定兩類核酸組成上的差異。2.RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的概念雖與DNA相同.但其基本結(jié)構(gòu)單位是核糖核苷酸而不是脫氧核糖核苷酸。此外,部分RNA5′端或3′端有特殊的核苷酸序列,而且RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)中沒有DNA那樣復(fù)雜的順序組織。3.絕大多數(shù)RNA為單鏈分子,單鏈可自身折迭形成發(fā)夾(hairpin)樣結(jié)構(gòu)而有局部雙螺旋結(jié)構(gòu)的特征,這是各種RAN空間結(jié)構(gòu)的共同特征。RNA局部雙螺旋結(jié)構(gòu)中堿基互補(bǔ)配對(duì)規(guī)律是A對(duì)U和G對(duì)C。由于RNA分子內(nèi)部不能較全形成堿基配對(duì),故其堿基克分子比A不等于U,G不等于C,不存在DNA堿基比例的Chargaff規(guī)律。RNA 提取關(guān)鍵點(diǎn)病菌 RNA 在提取后也仍然具有傳染性。無錫正規(guī)RNA提取試劑直銷價(jià)
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對(duì)于動(dòng)物組織、簡(jiǎn)單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡(jiǎn)單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成。無錫正規(guī)RNA提取試劑直銷價(jià)目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。
RNA提取關(guān)鍵點(diǎn):RNA的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無數(shù)人頭疼的問題,較佳方法是保證樣品完全裂解,但相同的裂解方案換了一個(gè)樣本可能就沒轍了。為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配,或者在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶K、溶菌酶等)。BIOG血液RNA快速提取試劑盒是公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)在綜合比較了國(guó)外同類較好產(chǎn)品的基礎(chǔ)上反復(fù)研制優(yōu)化而成,專門用于血液RNA的快速提取純化。本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液配方,可直接從新鮮、冷凍或陳舊的全血中提取高質(zhì)量的RNA,操作簡(jiǎn)便快速,只需15分鐘即可完成血液RNA提取。RNA提取得率較高,可在200μL全血中提取5μg左右RNA。BIOG血液RNA快速提取試劑盒采用了較新的較好離子膜,裂解液和洗脫液經(jīng)過多次優(yōu)化,有效地去除了蛋白、色素、脂類等雜質(zhì)污染,特別適用于血液包括細(xì)菌、病菌等傳染的分子檢測(cè)。
總RNA的定義:總RNA=mRNA+tRNA+rRNA,即:總RNA就是指mRNA、tRNA、rRNA的總和。這是在還沒有發(fā)現(xiàn)lncRNA等microRNA的時(shí)候的概念。但是卻被各大公司默認(rèn)的概念,一直延續(xù)至今。所以各位可以去各大公司的網(wǎng)站,看一看總RNA提取試劑盒案例提供的RNA電泳圖,只有表示總RNA的2條帶——28s和18s;表示microRNA的5s帶,要不沒有,要不很弱。那么mRNA在哪里呢?從RNA電泳圖上能不能看到呢?真正成熟的mRNA,主要集中在28s和18s之間和上下的熒光背景(一般每條基因mRNA量很少,所以,整體一般看不到明顯帶,只表現(xiàn)為28s和18s中間和上下的連續(xù)的涂抹帶)。純的RNA用RE緩沖液洗脫,不用酚提取或醇沉淀。
細(xì)菌RNA快速提取試劑盒:該產(chǎn)品基于獨(dú)特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶,然后用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的去蛋白、漂洗的步驟將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNaseFreeH2O將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。該產(chǎn)品可在30min內(nèi)完成樣品RNA的提取,提取的總RNA完整性好,無蛋白和基因組DNA污染。注意事項(xiàng):初次使用前請(qǐng)先在漂洗液RW瓶加入指定量無水乙醇,加入后請(qǐng)及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大量清水或者生理鹽水沖洗。所有離心操作步驟,均可在室溫(15-25℃)下進(jìn)行。提取細(xì)菌RNA需先配制加了溶菌酶或者Lysostaphin的TE(10mMTris-HCl,1mMEDTA),TE中已加入溶菌酶或者Lysostaphin,濃度為1mg/mL。當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒,但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(zhǎng)的問題。南京RNA提取試劑單價(jià)
為了使這種酶對(duì)降解的影響較小化,較好在采集時(shí)就穩(wěn)定好樣本中的 RNA。無錫正規(guī)RNA提取試劑直銷價(jià)
RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區(qū)別:紫外吸收:核酸的λm=260nm,堿基展開程度越大,紫外吸收就越厲害。當(dāng)A=1時(shí),DNA:50ug/ml,RNA和單鏈DNA:40ug/ml,寡核苷酸:20ug/ml。用A260/A280還可來表示核酸的純度。沉降速度:對(duì)于拓?fù)洚悩?gòu)體(核苷酸數(shù)目相同的核酸),其沉降速度從達(dá)到小依次為:RNA;超螺旋DNA>解鏈環(huán)狀DNA;松弛環(huán)狀DNA;線形DNA也就是在離心管中較上層是線形DNA,較下面是RNA。電泳:核苷酸、核酸均可以進(jìn)行電泳,泳動(dòng)速度主要由分子大小來決定,因此,電泳是測(cè)定核酸分子量的好方法。DNA分子量測(cè)定較直接的方法:用適當(dāng)濃度的EB(溴嘧啶)染色DNA,可以將其他形式的DNA變成線形DNA,用電鏡測(cè)出其長(zhǎng)度,按B-DNA模型算出bp數(shù),根據(jù)核苷酸的平均分子量就可計(jì)算出DNA的分子量。無錫正規(guī)RNA提取試劑直銷價(jià)