永生化的細胞系往往相當(dāng)健壯，因此，使用實驗室自制的凍存培養(yǎng)基，效果也不錯。典型的配方是在生長培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清，或只是在血清中加入10%的DMSO。DMSO的作用是取代細胞中的一些水，以防止冰晶形成，刺穿細胞。據(jù)賽默飛世爾科技的較深科學(xué)家Rhonda Newman介紹，DMSO還能防止細胞在冷凍期間發(fā)生收縮，而后在解凍時又變得腫脹。血清，這種富含營養(yǎng)成分的物質(zhì)，直接支持細胞?！爱?dāng)細胞處于這種營養(yǎng)豐富的環(huán)境時，它們能夠更好地復(fù)蘇。無任何外源蛋白和血清，適用于各類動物細胞株凍存。正規(guī)無血清細胞凍存液哪家好

細胞凍存：就凍存細胞而言，為了防止細胞在溫度下降時產(chǎn)生胞內(nèi)細微冰晶，其溫度的下降不能太快。標準的操作是每一分鐘下降一度。有以下三種建議：（1）優(yōu)先推薦使用程控降溫儀。（2）其次，加有異丙醇的細胞凍存盒，基本上也可以保證每分鐘1℃左右的降溫速度；（3）還有一些普遍的簡易凍存方法。如4℃半小時，-20℃半小時，然后-80℃過夜，再放入液氮；用泡沫盒（裝15mL離心管的那種）加一個保鮮袋，直接放在-80℃凍存；也可以用紗布做成袋子，將細胞懸掛在液氮上方，隔天轉(zhuǎn)入液氮；在凍存管外面包上棉花，直接放在-80℃冰箱就能夠達到緩慢降溫的效果；有的時候如果確實比較緊急的話，向96孔凍存盒的內(nèi)部加滿自來水，再將凍存管放置孔中，直接置于-80℃，這樣也能夠達到緩慢降溫的目的。唐山無血清細胞凍存液哪家便宜凍存細胞可直接存放于-80℃冰箱，穩(wěn)定保存數(shù)年。

細胞凍存是細胞培養(yǎng)技術(shù)中細胞進行保種并長期保存的常用方法，其中細胞凍存液，作為細胞凍存時必須使用的一種溶液，不光光是說只是用來進行細胞的保存，在細胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關(guān)鍵作用，因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要。如果不加任何條件直接凍存細胞，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH值改變、蛋白變性等，從而引起細胞死亡。而細胞凍存液就相當(dāng)于細胞的保護劑，在凍存細胞時將細胞懸浮于凍存液中，可使冰點降低，提高細胞膜對水的通透性，在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞，可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。這樣就使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，在需要時直接復(fù)蘇就可恢復(fù)細胞活性。

細胞凍存步驟說明：配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。去除PBS，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細胞消化下來;離心1000rpm，5min;去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)存液中細胞的較終密度為5×106/ml~1×107/ml;將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml;在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者;凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min;當(dāng)溫度達-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。凍存液成分由原來血清變?yōu)闊o血清，無動物源成分。

無血清細胞凍存液復(fù)蘇細胞實驗步驟：1.從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1 ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9 ml該細胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3.離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm，4℃，3~5 min），移去上清液。4.清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能：用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途，無動物源組分。上海珠海無血清細胞凍存液

無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：不含血清，較大減少細胞污染。正規(guī)無血清細胞凍存液哪家好

無血清細胞凍存液對比含血清細胞凍存液的優(yōu)勢：傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），較后才移至液氮罐中進行長期的儲存。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量的死亡。）正規(guī)無血清細胞凍存液哪家好