1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會分泌抗原呈遞外泌體(antigenpresentingvesicle),所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗一些病癥反應(yīng)。2007年HValadi等進一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中。目前的主流觀點認(rèn)為,外泌體的產(chǎn)生過程為:細(xì)胞膜內(nèi)陷,形成內(nèi)體(endosome),再形成多泡體(multivesicularbodies,MVB),較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體較早見于1981年,EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡,并命名為exosome。對于外泌體的作用,當(dāng)時推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。唐山外泌體提取試劑廠家推薦
由于這些核酸被囊膜包裹而被保護,穩(wěn)定性高,不易降解,是一種用于一些病癥診斷和預(yù)后監(jiān)測的非常理想的新型生物標(biāo)記物一些疾病的早期診斷、用藥監(jiān)控、預(yù)后判斷。近年來,隨著人們對外泌體的研究和認(rèn)識加深,外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷、治病和監(jiān)測;如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液、唾液、腹水、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的,其是活細(xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA),在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用。深圳外泌體提取試劑報價外泌體(Exosome)發(fā)現(xiàn)于1986年,是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體。
外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。
1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。
外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細(xì)胞來源的外泌體,包括免疫細(xì)胞(B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞)、病細(xì)胞、上皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞,釋放出帶有載體的外泌體,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中受體細(xì)胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細(xì)胞可直接或間接地受到外泌體的影響,刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾?。和饷隗w可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用。體外培養(yǎng)心血管疾病的細(xì)胞收集的外泌體與疾病相關(guān)的代謝適應(yīng)有關(guān);體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的外泌體具有保護心血管的作用。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體可用于功能研究。太原正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體提取:較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑。唐山外泌體提取試劑廠家推薦
聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集細(xì)菌,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。唐山外泌體提取試劑廠家推薦
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