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通用細(xì)胞凍存液(無(wú)血清)的簡(jiǎn)介:隨著實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展,除了原代培養(yǎng)之外,人工開(kāi)發(fā)出來(lái)的細(xì)胞系的保存越來(lái)越重要。細(xì)胞冷凍的原理在于盡可能降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成,減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對(duì)細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷,從提高細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的存活率。細(xì)胞凍存的數(shù)量應(yīng)保證復(fù)蘇時(shí)低溫保護(hù)劑獲得稀釋,稀釋后的細(xì)胞濃度扔高于正常傳代的細(xì)胞濃度為宜,這是因?yàn)楫?dāng)?shù)蜏乇Wo(hù)劑稀釋以后,該濃度一般不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成毒性損傷。通用細(xì)胞凍存液(無(wú)血清)主要由培養(yǎng)基、DMSO 等組成,不含血清,是一種經(jīng)典的無(wú)菌凍存液。用于各種哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞系、雜交瘤細(xì)胞等的凍存。含血清,細(xì)胞污染(細(xì)菌、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高。廈門正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)
無(wú)血清細(xì)胞凍存液,細(xì)胞凍存與復(fù)蘇后,平均活細(xì)胞回收比例超過(guò)80%。與含血清凍存液比較,BI無(wú)血清凍存液細(xì)胞存活率都有較佳的表,BI無(wú)血清細(xì)胞凍存液也適用于動(dòng)物血清培養(yǎng)的細(xì)胞凍存。復(fù)蘇細(xì)胞:1.將細(xì)胞凍存管由液態(tài)氮中取出,置于37度水浴快速溶解回溫。此時(shí)可準(zhǔn)備培養(yǎng)基、無(wú)菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。2.于生物安全柜內(nèi),直接以少量培養(yǎng)基反復(fù)沖融,使細(xì)胞團(tuán)塊化凍。3.先在無(wú)菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基,再將化凍的細(xì)胞懸液加入離心管中。以200~300g,3分鐘離心收集細(xì)胞。4.倒去上清液,以新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。5.隔天更換新鮮培養(yǎng)基,并觀察細(xì)胞存活狀況。濟(jì)南無(wú)血清細(xì)胞凍存液直銷價(jià)無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液:能夠滿足大部分體外培養(yǎng)細(xì)胞的凍存需求。
無(wú)血清細(xì)胞凍存液的使用方法及注意事項(xiàng):無(wú)血清細(xì)胞凍存液:含多種保護(hù)劑成分,一些保護(hù)劑,易于穿透細(xì)胞,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶 液的電解質(zhì)濃度,減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量,我公司無(wú)血清細(xì)胞凍存 液,為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),較大提高了細(xì)胞復(fù) 蘇存活率。 【產(chǎn)品用途】 1.用于免疫細(xì)胞及干細(xì)胞的存儲(chǔ)。 2.細(xì)胞保藏中心,用于細(xì)胞株的長(zhǎng)期保存。 3.科研高校,細(xì)胞株凍存。 4.醫(yī)院樣本庫(kù)細(xì)胞樣本保存。 【使用方法】 1、細(xì)胞凍存前準(zhǔn)備 (1)要求凍存的細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,且活率大于90%。 (2)計(jì)算細(xì)胞密度,一般要求密度在1-3x10 cells/mL,不同細(xì)胞系 請(qǐng)參照附表。 2、細(xì)胞凍存過(guò)程 (1)將要凍存的細(xì)胞懸液,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),計(jì)數(shù)后離心,800 3min即可。 度保存的無(wú)血清凍存液緩慢加入離心后的細(xì)胞沉淀中,根據(jù)密度調(diào)整細(xì)胞凍存 液用量。 (3)反復(fù)吹吸混勻后,分裝于細(xì)胞凍存管中,每管500ul-1000ul, (建議500ul/管)。
無(wú)血清細(xì)胞凍存液的操作規(guī)范:1、培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)晚期,顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無(wú)污染等。選擇狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作(注:貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,用胰蛋白酶消化并用完全培養(yǎng)基終止消化,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù))。2、500~1000g離心5min,棄上清。3、加入適量的細(xì)胞凍存液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1~10×106/ml,置于凍存管中密閉。4、采取逐級(jí)降溫保存:4℃放置20min,-20℃放置30min,-70℃?過(guò)夜,置于液氮罐中長(zhǎng)期存儲(chǔ)。注意:務(wù)必超凈工作臺(tái)內(nèi)無(wú)菌操作,避免污染。雜交瘤細(xì)胞凍存時(shí)應(yīng)定期復(fù)蘇,以檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性。無(wú)血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):可培養(yǎng)板整板凍存,例如雜交瘤細(xì)胞凍存時(shí)可節(jié)省篩選過(guò)程。
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是“慢凍快融”,這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多用二甲基亞砜(DMSO)作為保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性;緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的物理?yè)p傷。復(fù)蘇細(xì)胞采用快速融化的方法可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。血清完全細(xì)胞凍存液,通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株。特別配方有效提高細(xì)胞存活率和活力。不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等污染,確保凍存細(xì)胞安全。適合用于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。無(wú)血清細(xì)胞凍存液:為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),較大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。濟(jì)南無(wú)血清細(xì)胞凍存液直銷價(jià)
無(wú)血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):因不含血清,批次間差異小。廈門正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)
無(wú)血清細(xì)胞凍存液:1. 逐滴加入5 - 7 mL的預(yù)熱的培養(yǎng)基到15 mL的離心管中,加入的同時(shí)輕輕混勻。2. 室溫(15 - 25°C)以300 x g離心5分鐘。3. 吸出培養(yǎng)基,使細(xì)胞沉淀完好無(wú)損。使用2 mL血清移液管輕輕將細(xì)胞沉淀重懸于1 mL的培養(yǎng)基中。小心保持細(xì)胞作為聚集體。4. 將0.5 mL的細(xì)胞混合物轉(zhuǎn)移到含有培養(yǎng)基的預(yù)包被的6孔板的培養(yǎng)孔中(例如,每個(gè)冷凍管可以鋪板兩個(gè)孔)。注意:鋪板多少孔可能需要根據(jù)凍存的細(xì)胞聚集體數(shù)量進(jìn)行調(diào)整。通常在復(fù)蘇后,要比在常規(guī)的傳代鋪板更多的細(xì)胞聚集體數(shù)量。將培養(yǎng)板放入37°C培養(yǎng)箱??焖偾昂笞笥业膿u晃培養(yǎng)板數(shù)次,將細(xì)胞聚集體分布均勻。24小時(shí)內(nèi)不要移動(dòng)培養(yǎng)板。廈門正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)
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