糖原染色法:染色原理細胞胞漿中存在糖原或多糖類物質(如糖蛋白、粘多糖、糖脂、粘蛋白等),過碘酸能使細胞內的多糖乙二醇基氧化為二醛基,其與Schiff試劑中的無色品紅結合后呈現(xiàn)紫紅色,沉積在細胞內多糖所在之處。染色步驟:1.組織石蠟包埋切片后脫蠟至水,蒸餾水洗2min(細胞爬片4%多聚甲醛固定后水洗);2.滴加過碘酸溶液,氧化5min;3.蒸餾水洗10min;4.滴加Schiff試劑,侵染10-20min;5.傾去Schiff 試劑,流水沖洗10min;6.滴加蘇木素染色液,染核1-2min;7.流水沖洗5min;8.酸性乙醇分化液分化冷凍切片染色時間盡量要短。湖南品牌糖原染色試劑盒平均價格
糖原染色(PAS):(1)原理:過碘酸將血細胞內的糖原氧化,生成醛基。醛基與雪夫液中的無色品紅結合,形成紫色化合物,定位于細胞質中。(2)操作方法:干燥涂片,滴加甲醛固定液固定10分鐘,流水沖洗,晾干。滴加過碘酸溶液作用20分鐘,流水沖洗,晾干。滴加雪夫液作用60分鐘,流水沖洗,晾干。滴加甲基綠溶液復染10分鐘,流水沖洗,晾干鏡檢。(4)臨床意義:根據(jù)染色陽性程度和陽性物形態(tài)鑒別主要用于急性淋巴細胞白血病和急性非淋巴細胞白血病鑒別,還有助于紅白血病與巨幼細胞貧血和溶血性貧血的鑒別診斷江西品質好的糖原染色試劑盒過碘酸將血細胞內的糖原氧化,生成醛基。
特染的應用價值:現(xiàn)代病理學中免疫組織化學技術、電子顯微鏡技術以及其它細胞及分子生物學技術應用日益普遍,但由于這些技術要求一定的實驗條件以及所需的試劑價格較為昂貴,對于一部分病人以及某一些基層醫(yī)院是比較難以接受的。而組織化學技術則具有無需復雜的實驗條件以及較為昂貴的試劑操作又比較簡單的優(yōu)勢,在臨床病理學診斷中具有重要的應用價值。比如,當細胞中出現(xiàn)色素,是黑色素還是含鐵血黃素以及當組織中出現(xiàn)均一化學物質是否為淀粉樣變性等,用組織化學技術區(qū)別起來很簡單,所以組織化學技術,雖然已有幾十年到幾百年的歷史,仍是一個很有實用價值的技術
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:盡可能選取小塊新鮮組織及時固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前決不能用水或生理鹽水等浸洗。應避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能較好地保存糖原,但有使糖原流動到細胞一側的現(xiàn)象,多數(shù)人認為是由于固定劑把細胞內的糖原推向固定劑對組織浸透的方向而造成。其他組織應用中性福爾馬林固定為佳。組織在4℃左右溫度內固定與保存,是針對糖的性質和避免糖原溶于水而采取的相應措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能 白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此較好不單獨使用乙醇固定,以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳可以選用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細胞。
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糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蠟切片脫蠟至水。(2)0.5%過碘酸水溶液5分鐘。或1%過碘酸95%酒精溶液(過碘酸再結晶應重新配制使用)。(3)蒸餾水洗,70%酒精洗。(4)Schiff氏液15-30分鐘。(Schiff氏液從冰箱取出升至室溫使用)(5)流水沖洗10分鐘。(6)蘇木素浸染細胞核2-3分鐘。(7)脫水、透明、封蓋。結果:糖原呈紅色,細胞核呈藍色。試劑配制:(1)0.5%過碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。(2)Schiff氏試劑。堿性品紅1g蒸餾水200ml1N鹽酸(98.3ml比重1.16鹽酸,加入蒸餾水成1000ml)20ml偏重亞硫酸鈉或鉀1g堿性品紅1g加入200ml蒸餾水,攪拌加熱沸騰,待冷卻至50℃過濾,加入當量鹽酸至25℃時加入偏重亞硫酸鈉。置于暗處,兩天后溶液變桔黃色或草黃色,然后加入少量活性碳并震蕩、過濾,此時溶液應為無色。保存冰箱備用。溶液如顯淺紅色或草黃色,染色效果較差湖南品牌糖原染色試劑盒平均價格