利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。 方法 通過醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白，并重構(gòu)成膠原纖維。然后，將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2～6 d，通過透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化。 結(jié)果 酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維，并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示：礦化2 d后，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維，膠原纖維部分礦化；礦化6 d后，膠原纖維內(nèi)部完全礦化，形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料。 結(jié)論 利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維，經(jīng)礦化可形成與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料。將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。南京鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。目前，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植。其中，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機(jī)礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白，其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織，數(shù)量有限，難以滿足臨床需要。因此，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo)。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物，在分子結(jié)構(gòu)上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu)，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄，并且制作簡便，成本低廉。杭州正規(guī)鼠尾膠原供應(yīng)商鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中。

一種基于鼠尾膠原蛋白：1.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于凍干止血材料中，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?% 2% 1%，余量的水。2.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級(jí)大鼠鼠尾。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于劑型為創(chuàng)可貼。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于劑型為噴霧劑。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等 步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞 培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠，模擬真實(shí)的生長環(huán)境， 使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長。 1，在使用鼠膠原蛋白 型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12 細(xì)胞的 貼壁和生長。 1mg/ml濃度以上，pH 左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠，檢查到 NIH-3T3 細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12 細(xì)胞在三維膠表面 正常生長。 使用方法： 1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度： 1-5ug/cm 0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。鼠尾膠原醋酸溶解：建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。

鼠尾膠原的提取步驟：配置含4.5mmol/lNacl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-Hcl溶液（用鹽酸將其PH值調(diào)至7.5） 取鼠尾，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱，置于生理鹽水中，稱重，再倒掉生理鹽水，酒精中浸泡20分鐘 離心膠原溶液，（1200rpm10min) 取上清 每600上述粗提液加100ml0.14mol/l NaOH溶液離心，（8000rpm 5min) 其上清，留絮狀沉 10.將絮狀沉淀物置于三蒸水中，用0.1mol/l(1000:6) 醋酸溶解絮狀沉淀物，加入消毒過的攪拌 子，冷房攪拌數(shù)天，得絮狀膠原。 注意所有和膠原有關(guān)的操作都在冰上進(jìn)行\(zhòng) Rat tail collagen type 配置含4.5mmol/L NaCl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-HCl 溶液（用鹽酸將其pH值調(diào)至7.5）； 于-20冰箱中取出鼠尾，浸泡75%或70%酒精，解凍； 在一小培養(yǎng)皿中放置少量生理鹽水，置于電子秤上，調(diào)零； 取鼠尾，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱，置于生理鹽水中。吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）。蘇州鼠尾膠原服務(wù)電話

鼠尾膠原醋酸溶解：按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。南京鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對(duì)于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的:探討鼠尾膠原對(duì)過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實(shí)驗(yàn)組)和普通培養(yǎng)皿(對(duì)照組)中,并且均用0,10,100μmol/L H2O2誘導(dǎo)。24 h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)。結(jié)果與結(jié)論:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細(xì)胞存活率及細(xì)胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性。南京鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)