鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個(gè)材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水，采用冷凍干燥工藝制備。本發(fā)明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備，較傳統(tǒng)的止血材料不可吸收、容易引起機(jī)體過(guò)敏、止血效果差等缺點(diǎn)，本發(fā)明所制備的止血材料具有人體內(nèi)可吸收，生物相容性好；止血效果快，具有很強(qiáng)的親水性；同時(shí)可啟動(dòng)血小板的凝聚，一旦血小板凝聚，就可形成血栓，進(jìn)而促使血漿結(jié)塊阻止血流。同時(shí)，膠原表面的特定區(qū)域可以與細(xì)胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結(jié)合，可以起到防止腸粘連的功效。將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡。濟(jì)南正規(guī)鼠尾膠原直銷價(jià)

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽(yáng)性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法，并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨鼠尾膠原醋酸溶解：在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成膠過(guò)程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來(lái)中和。需要的溶液 ( 均需要 無(wú)菌 、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：將培養(yǎng)器皿在室溫(25 度左右)下 放置 20 分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是 10PBS， 使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。 B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制 200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH 加到膠原溶液中，會(huì)由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即 混勻。再加入 23ul 10PBS 10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH 左右，如果 PBS 或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用 pH 試紙測(cè)試)。加入 760ul 的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放 20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 注意事項(xiàng) 型在室溫下pH 中性時(shí)可迅速成膠，在操作過(guò)程中要 盡量保持低溫。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法，經(jīng)過(guò)醋酸（HAc）抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得。堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。

含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）。加入760μL的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠，在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。鼠尾膠原醋酸溶解：制備成濃度為0.1%的溶液。昆明正規(guī)鼠尾膠原直銷價(jià)

將無(wú)菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來(lái)制備氨蒸氣室。濟(jì)南正規(guī)鼠尾膠原直銷價(jià)

使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例，用無(wú)菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開(kāi)蓋在超凈臺(tái)上過(guò)夜晾干，也可以在室溫放置1小時(shí)后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。2、三維膠原凝膠的制備：A、無(wú)細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。濟(jì)南正規(guī)鼠尾膠原直銷價(jià)