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近年來,國內(nèi)外利用某些細菌特有的酶,選擇相應的作用底物,研制出某些細菌專門用的的顯色培養(yǎng)基,用于細菌的分離鑒別,收到了良好的效果,這種顯色培養(yǎng)基實際上也是鑒別培養(yǎng)基。其基本原理是將色原(或熒光原)與細菌作用底物的結(jié)合物加于培養(yǎng)基中,當細菌含有相應酶時,使該結(jié)合物分解而顯色(或顯示熒光)。如色原糖苷結(jié)合物在糖苷酶作用下分解,使糖苷與色原分離,并顯示顏色;熒光氨基酸結(jié)合物(不顯熒光)在氨基肽酶作用下,使氨基酸與熒光物質(zhì)分離而顯示熒光。常用顯色的色原有α-萘酚、β-萘酚、鄰位硝基酚、對位硝基酚、對硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等;常用的熒光物有4-甲基傘形酮(又稱7-羥基4-甲基香豆素)等。目前,顯色培養(yǎng)基已用于多種細菌的分離鑒別培養(yǎng),如沙門菌、大腸埃希菌、李斯特菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌、白色念珠菌等顯色培養(yǎng)基。培養(yǎng)基是用于微生物、細胞、組織等體外培養(yǎng)的營養(yǎng)精制的物質(zhì)。MYGP培養(yǎng)基基礎
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在 CO2 培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagle′s液,如果只是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。由于大多數(shù)細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細胞生長將產(chǎn)生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養(yǎng)用液時,需要注意一點:新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時,溶液的pH 還會向上浮動0.2左右。碳酸氫鈉瓊脂基礎需要控制pH值、溫度、氣氛等因素,以保證培養(yǎng)基的穩(wěn)定性。
按培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分是否完全區(qū)分:1.基本培養(yǎng)基,亦稱“較低限度培養(yǎng)基”。只能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養(yǎng)基,稱為基本培養(yǎng)基,是含有營養(yǎng)要求較低成分的合成培養(yǎng)基,常用“[-]”表示。這種培養(yǎng)基往往缺少某些生長因子,所以經(jīng)過誘變過的營養(yǎng)缺陷型菌株不能生長。2.完全培養(yǎng)基,基礎培養(yǎng)基添加血清等物質(zhì)后,叫完全培養(yǎng)基,也叫(血清)細胞培養(yǎng)基。完全培養(yǎng)基可用來滿足微生物的各種營養(yǎng)缺陷型菌株的生長需要,常以“[+]”表示。3.補充培養(yǎng)基,凡是只能滿足相應的營養(yǎng)缺陷型生長需要的組合培養(yǎng)基,稱為補充培養(yǎng)基,它是在基本培養(yǎng)基中加入該菌株不能合成的營養(yǎng)因子而組成的。根據(jù)在基本培養(yǎng)基中加入的是A或B等營養(yǎng)因子代謝物而分別用[A]或[B]等來表示。
動物細胞培養(yǎng)必需的溶液,平衡鹽水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎溶液。PH調(diào)整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羥乙基哌嗪乙烷磺酸)細胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素,每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素:終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液。3)制霉菌素:濃度25U/ml,小瓶分裝,每瓶一次用完。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清,前者來源少,價格高;后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛,因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖等。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。好氧菌需要富含氧氣和富含葡萄糖的培養(yǎng)基,而厭氧菌則需要采用無氧培養(yǎng)技術(shù)。
還有一些鑒別性培養(yǎng)基,是利用細菌特有的各種酶系統(tǒng),能分解利用各種特定的糖、醇、氨基酸或其他基質(zhì)而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)堿或產(chǎn)生其他可見物質(zhì),依此進行細菌的鑒別,例如常用的生化培養(yǎng)基。用于細菌生化特性試驗的培養(yǎng)基特點是在無糖的基礎培養(yǎng)基中加人某種特定的基質(zhì),并加人指示劑,細菌在此類培養(yǎng)基中的一系列生化反應結(jié)果,均通過指示劑顯示出來。此類培養(yǎng)基為生化反應鑒別培養(yǎng)基。根據(jù)用量又可分為常量生化培養(yǎng)基和微量生化培養(yǎng)基。值得注意的是生化試驗培養(yǎng)基的某些成分受高溫、pH等諸多因素的影響,在配制和使用時,應根據(jù)實際情況嚴格掌握,防止有效成分被破壞,以保障其使用效果。培養(yǎng)基可以分為有機培養(yǎng)基和無機培養(yǎng)基兩類。YMA培養(yǎng)基
常見的培養(yǎng)基有LB培養(yǎng)基,YPD培養(yǎng)基,M9培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基等。MYGP培養(yǎng)基基礎
選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑),標本接種于此類培養(yǎng)基后,由于抑菌劑的選擇性抑制作用,使非目的菌受到不同程度的抑制,更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過一定時間的增菌培養(yǎng),再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基,可以提高目的菌的陽性檢出率。抑菌劑的種類很多,常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉等。抑菌劑的加入量要適宜、準確,有的劇毒,有的不耐高熱,配制時須特別注意。MYGP培養(yǎng)基基礎
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