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制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基:(1)方法步驟:計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)倒平板操作的步驟:①將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上,右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶,將瓶口迅速通過(guò)火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固,大約需5~10min。然后,將平板倒過(guò)來(lái)放置,使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時(shí),才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí),就可以進(jìn)行倒平板了。液體培養(yǎng)基,80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。廣東不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備儀
培養(yǎng)基的購(gòu)置:從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來(lái)看,不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品,甚至同一廠家不同批號(hào)的產(chǎn)品都會(huì)存在差異。對(duì)培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評(píng)價(jià)后選擇合格的供應(yīng)商,這是培養(yǎng)基購(gòu)買過(guò)程中重要的步驟。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場(chǎng)信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè);企業(yè)是否通過(guò)了質(zhì)量管理體系的認(rèn)證是較為客觀的評(píng)價(jià)指標(biāo)。要求生產(chǎn)企業(yè)提供:培養(yǎng)基成分名稱及產(chǎn)品編號(hào)、批號(hào)、使用前的pH、儲(chǔ)藏信息和有效期、性能評(píng)價(jià)和所用測(cè)試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書以及必要的安全/危害數(shù)據(jù)等材料。廣東不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備儀培養(yǎng)基根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)基等。
培養(yǎng)基pH值不在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)的問(wèn)題:出現(xiàn)此類情況有很多原因,生物大致分為①?gòu)S家質(zhì)量:出廠時(shí)pH不穩(wěn)定。②滅菌問(wèn)題:是蒸壓過(guò)高或殺菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng),導(dǎo)致葡萄糖焦化,因此,pH值降低。③存放周期:保存時(shí)間超過(guò)保質(zhì)期或結(jié)塊水的質(zhì)量有問(wèn)題。④水質(zhì)問(wèn)題:采用去離子水/蒸餾水/純凈水等,不要采用礦泉水和自來(lái)水。⑤存儲(chǔ)溫度:儲(chǔ)存溫度過(guò)高。⑥光線直射等六種原因,可逐一檢查排除解決問(wèn)題。這樣的培養(yǎng)基稱之為鑒別培養(yǎng)基。例如用以檢查飲水和乳品中是否含有腸道致病菌的伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基就是一種常用的鑒別性培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基制備的基本方法:1.培養(yǎng)基配方的選定:同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外.一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料.加以比較核對(duì)。2、培養(yǎng)基的制備記錄,每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)推各稱,配方及其來(lái)源.和各種成份的牌號(hào)。較終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制各的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份。3.培養(yǎng)基成分的稱取。培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂.較好一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號(hào),并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。5、培養(yǎng)塞pH的初步調(diào)整培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正。培養(yǎng)自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應(yīng)由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成。
消毒與滅菌的區(qū)別:消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法單殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(對(duì)于一些不耐高溫的液體)還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法:①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法;②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱;③培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈。牛肉浸液中加入適量的蛋白胨、氯化鈉、磷酸鹽,調(diào)節(jié)pH7.2~7.6,經(jīng)滅菌處理后,即為基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基。北京Systec培養(yǎng)基制備儀
組合培養(yǎng)基是一類按微生物的營(yíng)養(yǎng)要求精確設(shè)計(jì)后用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養(yǎng)基。廣東不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備儀
培養(yǎng)基制備儀:培養(yǎng)基的種類繁多,但制備的方法大同小異,一般可分為6個(gè)步驟:用水、稱量、溶解復(fù)水、滅菌、pH測(cè)定、保存。1、必須選用專門純凈水或者經(jīng)消毒過(guò)后的無(wú)菌水。2、培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)水的容器不得用銅鍋或鐵鍋,放置離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長(zhǎng)。3、容器的體積須大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍,預(yù)防出現(xiàn)溢出情況。4、在對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行加熱時(shí),若培養(yǎng)基內(nèi)含有瓊脂粉成分,則需要將其充分浸泡一段時(shí)間。加熱的過(guò)程中不斷進(jìn)行攪拌防止出現(xiàn)培養(yǎng)基結(jié)底炭化從而造成成分損害。部分培養(yǎng)基則需要使用沸水進(jìn)行加熱,預(yù)防發(fā)生局部燒焦及沸騰溢出。5、瓊脂類培養(yǎng)基進(jìn)行再融化時(shí)應(yīng)使用沸水浴或流動(dòng)蒸汽進(jìn)行加熱,較多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去。6、而當(dāng)對(duì)培養(yǎng)基實(shí)施滅菌時(shí),需嚴(yán)格按照說(shuō)明規(guī)范操作。但是也不能盲目按照說(shuō)明的時(shí)間進(jìn)行,需結(jié)合實(shí)際情況,合理調(diào)節(jié)滅菌時(shí)間,防止出現(xiàn)培養(yǎng)基滅菌過(guò)度而造成的成分變性。廣東不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備儀
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