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藥物藥效評估方案

來源: 發(fā)布時間:2023-08-14

隨著電子產(chǎn)品的大量使用,用眼的時間和強度已遠超過去,用眼過度引起一系列視力問題。研究表明,高度近視、視網(wǎng)膜疾病、白內(nèi)障、眼干燥關節(jié)綜合征均與眼細胞凋亡相關。斑馬魚的眼部血管結構跟人非常相似,斑馬魚視網(wǎng)膜結構也跟人高度相似。用霉酚酸嗎啉乙酯可以誘發(fā)斑馬魚眼細胞凋亡,模擬人的眼部疾病。用特異性熒光染色(呈綠色),患有眼疾的斑馬魚眼細胞凋亡較正常斑馬魚明顯增多,在熒光顯微鏡下可以觀察到。經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗,眼保護劑組斑馬魚眼細胞與正常對照組相似,并未出現(xiàn)模型對照組的大面積細胞凋亡情況。轉基因NBT斑馬魚評價周圍神經(jīng)保護劑功效。藥物藥效評估方案

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我們將受測試斑馬魚分成三組,分別是正常對照組、模型對照組和藥物組。其中正常對照組未攝入維拉帕米,模型對照組與藥物組都攝入了等量的維拉帕米(維拉帕米通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi))。藥物組先攝入地高辛之類的改善心動過緩藥物再攝入維拉帕米。服用改善心動過緩藥物后再加入維拉帕米共同處理至實驗終點后,我們對斑馬魚統(tǒng)計斑馬魚的心率??梢钥吹?,模型對照組心率明顯減慢,服用藥物組的心率與正常對照組比較相似,沒有明顯的心率減慢。藥物安全評價檢測項目斑馬魚模型實驗評價細胞凋亡。

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斑馬魚的基因與人類基因的相似度達到87%,斑馬魚肝臟中有許多與哺乳動物同源的脂質(zhì)代謝酶,與哺乳動物對外源化學物質(zhì)的防御機制相當,包括酶的誘導和氧化應激。而且斑馬魚幼魚通體透明,容易觀察到毒性表型。酒精性肝損傷是全世界發(fā)病率和死亡率的主要原因,酒精性肝損傷是過量飲酒的結果。當患者繼續(xù)飲酒時,會誘發(fā)嚴重的肝損傷形式,如脂肪性肝炎,纖維化,肝硬化和肝細胞。用乙醇可以誘發(fā)斑馬魚肝臟損傷,模擬人的肝臟疾病。我們評價斑馬魚肝臟毒性有4個指標:1.肝臟面積;2.肝臟變性程度;3.卵黃囊吸收延遲的發(fā)生率(卵黃囊是脂肪,卵黃囊吸收與肝功能密切相關);4.肝臟病理切片。

腦出血是指非外傷性腦實質(zhì)內(nèi)部血管破裂引發(fā)的腦內(nèi)出血病癥,占全部腦卒中的20%~30%,急性期病死率為30%~40%。羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGCR)是他汀類藥物發(fā)揮抑制作用的直接作用點,HMGCR功能被抑制會影響血管的完整性和穩(wěn)定性,誘發(fā)腦出血。由于斑馬魚大腦具有典型脊椎動物腦部形態(tài)學特征,血管與神經(jīng)系統(tǒng)在分子信號通路上與人和哺乳動物的同源性達到85%以上。在大量攝入辛伐他汀后,斑馬魚腦部也會出現(xiàn)腦出血的情況,患有腦出血的斑馬魚的腦部會出現(xiàn)明顯的片狀出血,而正常斑馬魚沒有;由于腦出血斑馬魚的心搏輸出量和血流速度也會降低,利用血流分析儀可明顯觀察到。腦出血可直接造成反應遲鈍、運動功能障礙,可通過行為分析軟件觀察斑馬魚的行為軌跡。我們評價斑馬魚腦出血有4個指標:1.腦出血發(fā)生率;2.心搏輸出量;3.血流速度;4.行為學(運動改善)。藥物毒性試驗、毒理毒性檢測評價。

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隨著電子產(chǎn)品的大量使用,用眼的時間和強度已遠超過去,用眼過度引起一系列視力問題。研究表明,高度近視、視網(wǎng)膜疾病、白內(nèi)障、眼干燥關節(jié)綜合征均與眼細胞凋亡相關。斑馬魚的眼部血管結構跟人非常相似,斑馬魚視網(wǎng)膜結構也跟人高度相似。用霉酚酸嗎啉乙酯可以誘發(fā)斑馬魚眼細胞凋亡,模擬人的眼部疾病。用特異性熒光染色(呈綠色),患有眼疾的斑馬魚眼細胞凋亡較正常斑馬魚明顯增多,在熒光顯微鏡下可以觀察到。我們將受測試斑馬魚分成三組,分別是正常對照組、模型對照組和藥物組。其中正常對照組未攝入霉酚酸嗎啉乙酯,模型對照組與服用眼保護劑組都攝入了等量的霉酚酸嗎啉乙酯(霉酚酸嗎啉乙酯通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi))。眼保護劑組在攝入霉酚酸嗎啉乙酯的同時攝入藍莓葉黃素酯之類的眼保護劑。服用一段時間眼保護劑后,我們對斑馬魚整體做凋亡細胞特異性染色,觀察細胞凋亡,同時制作成病理切片觀察眼部的病理結構變化。利用斑馬魚模型評價改善心臟出血功效。藥物的活性評價

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我們將受測試斑馬魚分成三組,分別是正常對照組、模型對照組和抗結腸炎藥物組。其中正常對照組未攝入TNBS,模型對照組與抗結腸炎藥物組都加入了等量的TNBS(TNBS通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi))??菇Y腸炎藥物組在攝入TNBS的同時攝入潑尼松之類抗結腸炎藥物。服用一段時間抗結腸炎藥物組后,我們觀察斑馬魚的腸腔面積變化、杯狀細胞數(shù)量??梢钥吹剑每菇Y腸炎藥物的腸腔面積與未加TNBS的正常對照組比較相似,沒有明顯的腸腔面積擴大。藥物藥效評估方案

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