雙光子顯微鏡的應用由于適合動態(tài)成像，雙光子顯微鏡一經問世便很快應用于神經科學、遺傳發(fā)育、藥物代謝等領域。雙光子顯微鏡能夠在細胞甚至是亞細胞水平上對***神經細胞的形態(tài)結構、離子濃度、細胞運動、分子相互作用等進行直接成像監(jiān)測，而且能夠進行光裂解、光轉染和光損傷等光學操縱。同時，雙光子顯微鏡能動態(tài)監(jiān)測**在體內的生長和轉移，并可對**治療過程中*細胞的變化進行實時觀測和評估。隨著光學技術、熒光探針技術、計算機成像技術的發(fā)展，雙光子顯微技術會得到更大提升和更廣的應用，未來不僅用于基礎研究，也將擴展到臨床應用。雙光子顯微鏡使用的是高能量鎖模脈沖器。國外bruker雙光子顯微鏡商家電話

從雙光子到三光子：科學家正在從雙光子轉向三光子顯微鏡。1996年，ChrisXu在康奈爾大學(Denk同導師實驗室)讀博期間發(fā)明了三光子顯微鏡，如果雙光子吸收可行，那么三光子看起來也是自然的發(fā)展方向。三光子成像使用更長的波長，大約在1.3和1.7微米，其成像深度也比雙光子更深，目前記錄約為2.2毫米，人類大腦皮層厚約4毫米。相比雙光子顯微鏡，三光子還要求以較低重頻使用更強和更短的激光脈沖，而傳統(tǒng)的鈦寶石激光器難以達到這些要求，但是對于摻鐿光纖飛秒光參量放大器則非常容易，比如我們的Y-Fi光參量放大器(OPA)。國外布魯克雙光子顯微鏡圖像對比度雙光子顯微鏡是新型的熒光顯微鏡，其原理大致是這樣的；

和很多偉大的科學發(fā)明一樣，雙光子顯微鏡的出現也有一點偶然，但正是那瞬間的靈感為生物科學尤其是神經科學帶來了一種**性的成像技術：雙光子激發(fā)熒光顯微鏡。1990年初，當WinfriedDenk剛從康奈爾大學博士畢業(yè)準備前往瑞士讀博后時，他看了一本關于激光掃描顯微鏡的書，從中了解到非線性光學效應——強光和物質的相互作用。當時，Denk有同事研究生物樣品中的鈣離子但苦于沒有強大的紫外激光器和光學元件，于是他就想到如果使用雙光子吸收就能夠繞開紫外，換言之，與其通過一個紫外光子激發(fā)標記的鈣離子，通過兩個雙倍波長的可見光光子也能激發(fā)相同的熒光。有了想法后馬上實驗。借了一套染料飛秒激光器，Denk聯(lián)合他的導師WattWebb及其博士生JamesStrickler只用六個小時就完成了實驗搭建，采集數據則用了兩到三天，于是一篇里程碑式的文章就此誕生了。

FHIRM-TPM 2.0擴大了微型雙光子顯微鏡的適用性和實用性，使神經科學家能夠更自由地探索更多新的行為范式，包括身體運動、長時程的復雜過程，如學習和記憶，社會互動和恐懼條件反射，甚至是慢性疾病的進展和老化，如神經發(fā)生和再生，疾病進展和衰老，以破譯大腦的奧秘。在一批“早鳥項目”中，該系統(tǒng)已被多個研究組應用于不同的模式動物和行為范式，如小鼠的社交新穎性識別、斑胸草雀受***調控后大腦特定神經元變化、新型神經遞質乙酰膽堿探針的傳導適應性分析以及獼猴三腦區(qū)成像等多項研究。依托兩代微型化雙光子成像技術，該團隊還在南京市江北新區(qū)建立了規(guī)?；咄磕X功能成像的南京腦觀象臺（Nanjing Brian Observatory），于2020年12月10日舉辦了落成典禮。通過與世界范圍內的神經科學家進行廣合作，腦觀象臺現正在服務三十多個科研項目，成為開展大型腦科學問題研究的重要科研服務平臺。雙光子顯微鏡成像技術及不同轉基因小鼠開展對多種臟器的成像研究。

光學顯微鏡和電子顯微鏡本質的區(qū)別在于，光學顯微鏡：用的是可見光電子顯微鏡：用的是高頻電子射波有什么區(qū)別，在于一個基本的原理，光的衍射。。。光波是一個有趣的東西，其中有一項，如果物體的體積小于光的波長，光一般可以繞過去，不發(fā)生明顯變化。也就是說，有這個物體和沒這個物體，在這種情況下，光是不會發(fā)生明顯改變的?？梢姽獾牟ㄩL（肉眼）：380～780納米，也就是，如果比380納米還要小的東西，用光學顯微鏡，無論你放大多少倍，也是看不見的。因為光繞過去了。。。光的衍射為了克服這個問題，科學家用波長更短的光去照射物體，也是就被觀測物。比如10納米級的光，這樣，就能看到我們用肉眼無論如何都看不見的東西。這就是電子顯微鏡多說一句，光速是不變的。光速=頻率×波長。波長越短，頻率越大。。頻率越大，光波的能量越大。這就是為什么電子顯微鏡的功率越大，能看到的東西越小。顏色取決于物體能反射光的波長的長短當你看到的物體小于較小可見光的波長，那它就是沒有顏色的。。。因為顏色是肉眼對于可見光頻率在大腦中的投影。。。。所以只能把他們統(tǒng)一變?yōu)楹诎?。。。沒有顏色不是透明的意思，它們不是肉眼可見顏色的定義中包含的。雙光子顯微鏡可以精確穿透較厚標本進行定點、有生命體的觀察！國外bruker雙光子顯微鏡商家電話

雙光子顯微鏡能夠進行光裂解、光轉染和光損傷等光學操縱。國外bruker雙光子顯微鏡商家電話

通過對微型光學系統(tǒng)的重新設計，FHIRM-TPM 2.0成像視野擴大至420×420平方微米，微型物鏡的工作距離擴展至1毫米，以實現非侵入式成像；嵌入了可拆卸的快速軸向掃描模塊，實現了180微米深度的三維體成像和多平面快速切換的實時成像。該模塊由一個快速的電動變焦透鏡和一對中繼透鏡組成，在不同深度成像時保持放大倍率恒定。其中，變焦模塊重量1.8克，研究人員可根據實驗需求自由拆卸。此外，新版微型化成像探頭還可整體即時拔插，極大地簡化了實驗操作，避免了長周期實驗時對動物的干擾。在重復裝卸探頭追蹤同一批神經元時，視場旋轉角小于0.07弧度，邊界偏差小于35微米。國外bruker雙光子顯微鏡商家電話