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多光子顯微鏡準(zhǔn)確定位

來源: 發(fā)布時間:2023-04-17

快速光柵掃描有多種實現(xiàn)方式,使用振鏡進行快速2D掃描,將振鏡和可調(diào)電動透鏡結(jié)合在一起進行快速3D掃描,但可調(diào)電動透鏡由于機械慣性的限制在軸向無法快速進行焦點切換,影響成像速度,現(xiàn)可使用空間光調(diào)制器(SLM)代替。遠程聚焦也是一種實現(xiàn)3D成像的手段。在LSU模塊中,掃描振鏡進行橫向掃描,ASU模塊包括物鏡L1和反射鏡M,通過調(diào)控M的位置實現(xiàn)軸向掃描。該技術(shù)不僅可以校正主物鏡L2引入的光學(xué)像差,還可以進行快速的軸向掃描。想要獲得更多神經(jīng)元成像,可以通過調(diào)整顯微鏡的物鏡設(shè)計來擴大FOV,但是具有大NA和大FOV的物鏡通常重量較大,無法快速移動以進行快速軸向掃描,因此大型FOV系統(tǒng)依賴于遠程聚焦、SLM和可調(diào)電動透鏡。多光子激光掃描顯微鏡已經(jīng)成為了一個活躍且多產(chǎn)的領(lǐng)域。多光子顯微鏡準(zhǔn)確定位

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快速光柵掃描有多種實現(xiàn)方式,使用振鏡進行快速2D掃描,將振鏡和可調(diào)電動透鏡結(jié)合在一起進行快速3D掃描,但可調(diào)電動透鏡由于機械慣性的限制在軸向無法快速進行焦點切換,影響成像速度,現(xiàn)可使用空間光調(diào)制器(SLM)代替。遠程聚焦也是一種實現(xiàn)3D成像的手段,如圖2所示。在LSU模塊中,掃描振鏡進行橫向掃描,ASU模塊包括物鏡L1和反射鏡M,通過調(diào)控M的位置實現(xiàn)軸向掃描。該技術(shù)不僅可以校正主物鏡L2引入的光學(xué)像差,還可以進行快速的軸向掃描。想要獲得更多神經(jīng)元成像,可以通過調(diào)整顯微鏡的物鏡設(shè)計來擴大FOV,但是具有大NA和大FOV的物鏡通常重量較大,無法快速移動以進行快速軸向掃描,因此大型FOV系統(tǒng)需要依賴于遠程聚焦、SLM和可調(diào)電動透鏡。靈長類多光子顯微鏡價格多少1990年A.Mayer在Science上刊文展示了雙光子激光掃描熒光顯微鏡。

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多束掃描技術(shù)可以同時對神經(jīng)元組織的不同位置進行成像。該技術(shù):對于兩個遠程成像位置(相距1-2mm以上),通常采用兩個**的路徑進行成像;對于相鄰區(qū)域,通常使用單個物鏡的多個光束進行成像。多光束掃描技術(shù)必須特別注意激發(fā)光束之間的串?dāng)_,這可以通過事后光源分離或時空復(fù)用來解決。事后光源分離法是指分離光束以消除串?dāng)_的算法;時空復(fù)用法是指同時使用多個激發(fā)光束,每個光束的脈沖在時間上被延遲,使不同光束激發(fā)的單個熒光信號可以暫時分離。引入的光束越多,可以成像的神經(jīng)元越多,但多束會導(dǎo)致熒光衰減時間重疊增加,從而限制了分辨信號源的能力;并且復(fù)用對電子設(shè)備的工作速度要求很高;大量的光束也需要較高的激光功率來維持單束的信噪比,這樣容易導(dǎo)致組織損傷。

當(dāng)細胞受到外界刺激時,隨著刺激時間的增加,即使繼續(xù)刺激,Ca2+熒光信號也不會繼續(xù)增強,反而會減弱,直至恢復(fù)到無刺激時的水平。對于細胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化,發(fā)現(xiàn)粘附過程中Ca2+熒光信號沒有變化,但當(dāng)配子融合時,Ca2+熒光信號強度出現(xiàn)一個不穩(wěn)定的峰值,持續(xù)數(shù)分鐘。這些現(xiàn)象對于研究受精發(fā)育的早期信號以及Ca2+在卵子和受精卵發(fā)育中的作用具有重要意義。在其他生理過程中,如細胞分裂和胞吐,Ca2+熒光信號的強度也會發(fā)生很大的變化。全球多光子顯微鏡主要生產(chǎn)地區(qū)分析,包括產(chǎn)量、產(chǎn)值份額等。

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單光子激發(fā)熒光的過程,就是熒光分子吸收一個光子,從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),躍遷以后,能量較大的激發(fā)態(tài)分子,通過內(nèi)轉(zhuǎn)換把部分能量轉(zhuǎn)移給周圍的分子,自己回到比較低電子激發(fā)態(tài)的比較低振動能級。處于比較低電子激發(fā)態(tài)的比較低振動能級的分子的平均壽命大約在10s左右。這時它不是通過內(nèi)轉(zhuǎn)換的方式來消耗能量,回到基態(tài),而是通過發(fā)射出相應(yīng)的光量子來釋放能量,回到基態(tài)的各個不同的振動能級時,就發(fā)射熒光。因為在發(fā)射熒光以前已經(jīng)有一部分能量被消耗,所以發(fā)射的熒光的能量要比吸收的能量小,也就是熒光的特征波長要比吸收的特征波長來的長。帶寬足以覆蓋鈦藍寶石激光器的可調(diào)諧范圍和用于多光子顯微鏡的許多其它激光器的典型中心頻率。bruker多光子顯微鏡作用

多光子顯微鏡是衡量一個國家制造業(yè)和高科技發(fā)展水平的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。多光子顯微鏡準(zhǔn)確定位

多光子顯微鏡成像深度深、對比度高,在生物成像中具有重要意義,但通常需要較高的功率。結(jié)合時間傳播的超短脈沖可以實現(xiàn)超快的掃描速度和較深的成像深度,但近紅外波段的光本身會導(dǎo)致分辨率較低。基于多光子上轉(zhuǎn)換材料和時間編碼結(jié)構(gòu)光顯微鏡的高速超分辨成像系統(tǒng)(MUTE-SIM)是由清華大學(xué)教授和北京大學(xué)彭研究員合作開發(fā)的。可實現(xiàn)50MHz的超高掃描速度,突破衍射極限,實現(xiàn)超分辨率成像。與普通熒光顯微鏡相比,該顯微鏡經(jīng)過改進,只需要較低的激發(fā)功率。這種超快、低功耗、多光子超分辨率技術(shù)在高分辨率生物深層組織成像中具有長遠的應(yīng)用前景。多光子顯微鏡準(zhǔn)確定位

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