細胞在受到外界刺激時,隨著刺激時間的增長,即使刺激繼續(xù)存在,Ca2+熒光信號不但不會繼續(xù)增強,反而會減弱,直至恢復到未加刺激物時的水平。對于細胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化情況,研究發(fā)現,配了在粘著過程中,Ca2+熒光信號未發(fā)生任何變化,而配子之間發(fā)生融合作用時,Ca2+熒光信號強度卻會出現一個不穩(wěn)定的峰值,并可持續(xù)幾分鐘。這些現象,對研究受精發(fā)育的早期信號及Ca2+在卵細胞和受精卵的發(fā)育過程中的作用具有重要的意義。在其它一些生理過程如細胞分裂、胞吐作用等,Ca2+熒光信號強度也會發(fā)生很強的變化。多光子顯微鏡,實現無創(chuàng)、實時、動態(tài)的生物組織觀測。共聚焦多光子顯微鏡代理
Ca2+是重要的第二信使,對于調節(jié)細胞的生理反應具有重要的作用,開發(fā)和利用雙光子熒光顯微成像技術對Ca2+熒光信號進行觀測,可以從某些方面對有機體或細胞的變化機制進行分析,具有重要的意義。利用雙光子熒光顯微成像技術可以觀察細胞內用熒光探針標記的Ca2*的時間和空間的熒光圖像的變化,還可以觀察細胞某一層面或局部的(Ca2+)熒光圖像和變化。通過對單細胞的研究發(fā)現,Ca2+不僅在細胞局部區(qū)域間的分布是不均勻的,而且細胞內各局部區(qū)域的不同深度或層次間也存在不同程度的Ca2+梯差即所謂的空間Ca2梯差。Ultima 2P Plus多光子顯微鏡多光子顯微鏡是一款針對厚樣本進行深層成像的利器,特別是在實驗中。
對于雙光子(2P)成像而言,離焦和近表面熒光激發(fā)是兩個比較大的深度限制因素,而對于三光子(3P)成像這兩個問題大大減小,但是三光子成像由于熒光團的吸收截面比2P要小得多,所以需要更高數量級的脈沖能量才能獲得與2P激發(fā)的相同強度的熒光信號。功能性3P顯微鏡比結構性3P顯微鏡的要求更高,它需要更快速的掃描,以便及時采樣神經元活動;需要更高的脈沖能量,以便在每個像素停留時間內收集足夠的信號。復雜的行為通常涉及到大型的大腦神經網絡,該網絡既具有局部的連接又具有遠程的連接。要想將神經元活動與行為聯(lián)系起來,需要同時監(jiān)控非常龐大且分布普遍的神經元的活動,大腦中的神經網絡會在幾十毫秒內處理傳入的刺激,要想了解這種快速的神經元動力學,就需要MPM具備對神經元進行快速成像的能力??焖費PM方法可分為單束掃描技術和多束掃描技術。
細胞在受到外界刺激時,隨著刺激時間的增長,即使刺激繼續(xù)存在,Ca2+熒光信號不但不會繼續(xù)增強,反而會減弱,直至恢復到未加刺激物時的水平。對于細胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化情況,研究發(fā)現,配了在粘著過程中,Ca2+熒光信號未發(fā)生任何變化,而配子之間發(fā)生融合作用時,Ca2+熒光信號強度卻會出現一個不穩(wěn)定的峰值,并可持續(xù)幾分鐘。這些現象,對研究受精發(fā)育的早期信號及Ca2+在卵細胞和受精卵的發(fā)育過程中的作用具有重要的意義。在其它一些生理過程如細胞分裂、胞吐作用等,Ca2+熒光信號強度也會發(fā)生很的變化。實現細胞內分子級觀測,多光子顯微鏡開啟生命科學新篇章。
2020年,TonmoyChakraborty等人提出了加速2PM軸向掃描速度的方法[2]。在光學顯微鏡中,物鏡或樣品緩慢的軸向掃描速度限制了體成像的速度。近年來,通過使用遠程聚焦技術或電調諧透鏡(ETL)已經實現了快速軸向掃描。但遠程對焦時對反射鏡的機械驅動會限制軸向掃描速度,ETL會引入球差和高階像差,無法進行高分辨率成像。為了克服這些限制,該小組引入了一種新的光學設計,可以將橫向掃描轉換為無球面像差的軸向掃描,以實現高分辨率成像。有兩種方法可以實現這種設計。***個可以執(zhí)行離散的軸向掃描,另一個可以執(zhí)行連續(xù)的軸向掃描。如圖3a所示,特定裝置由兩個垂直臂組成,每個臂具有4F望遠鏡和物鏡。遠程聚焦臂由振鏡掃描鏡(GSM)和空氣物鏡(OBJ1)組成,另一個臂(稱為照明臂)由浸沒物鏡(OBJ2)組成。兩個臂對齊,使得GSM與兩個物鏡的后焦平面共軛。準直后的激光束經偏振分束器反射進入遠程聚焦臂,由GSM進行掃描,使OBJ1產生的激光焦點可以進行水平掃描。多光子顯微鏡在生物醫(yī)學研究中有廣泛的應用,可以觀察細胞內的亞細胞結構、蛋白質分布、細胞活動等。進口多光子顯微鏡多光子激發(fā)
突破傳統(tǒng)光學成像極限,多光子顯微鏡適應各種復雜環(huán)境。共聚焦多光子顯微鏡代理
當細胞受到外界刺激時,隨著刺激時間的增加,即使繼續(xù)刺激,Ca2+熒光信號也不會繼續(xù)增強,反而會減弱,直至恢復到無刺激時的水平。對于細胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化,發(fā)現粘附過程中Ca2+熒光信號沒有變化,但當配子融合時,Ca2+熒光信號強度出現一個不穩(wěn)定的峰值,持續(xù)數分鐘。這些現象對于研究受精發(fā)育的早期信號以及Ca2+在卵子和受精卵發(fā)育中的作用具有重要意義。在其他生理過程中,如細胞分裂和胞吐,Ca2+熒光信號的強度也會發(fā)生很大的變化。共聚焦多光子顯微鏡代理