科學(xué)家利用鈣成像技術(shù)記錄大腦活動(dòng)。隨著功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展,神經(jīng)學(xué)家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術(shù)就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號(hào)和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號(hào)的改變反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度,以此daibiao細(xì)胞的功能狀態(tài)。目前它被廣泛應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測一群相關(guān)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,從而判斷其功能活動(dòng)。該技術(shù)的出現(xiàn)使得科學(xué)家可以親眼目睹神經(jīng)信號(hào)在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中時(shí)間和空間上的傳遞穿梭。長時(shí)間追蹤相同細(xì)胞,進(jìn)行可重復(fù)的科學(xué)研究對(duì)自由行為動(dòng)物進(jìn)行慢性鈣成像研究。美國神經(jīng)細(xì)胞鈣成像生產(chǎn)廠家
nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)是可以在自由活動(dòng)的動(dòng)物上進(jìn)行大范圍的動(dòng)態(tài)熒光成像的設(shè)備。通過nVist,您可以視覺化細(xì)胞活動(dòng),同步行為學(xué),以及長期追蹤神經(jīng)環(huán)路的活動(dòng)。nVista被應(yīng)用于全球的研究機(jī)構(gòu)中,產(chǎn)生了影響力的大數(shù)據(jù)庫。主要特征:利用GCamp鈣離子探針進(jìn)行成像功能完整的數(shù)據(jù)采集軟件,實(shí)現(xiàn)對(duì)焦,調(diào)焦,行為同步化單細(xì)胞分辨率下,可同時(shí)捕獲成百上千神經(jīng)元活動(dòng)長時(shí)間追蹤細(xì)胞,追蹤時(shí)間可長達(dá)數(shù)月電子對(duì)焦,保證視野范圍的恒定自由動(dòng)物行為學(xué):可運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)行為學(xué)測量方法,行為操作箱,迷宮,曠場等可進(jìn)行皮層,深部核團(tuán),以及腦干,中腦等區(qū)域的成像記錄動(dòng)物無需進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練鈣離子成像+自由活動(dòng)行為學(xué)1.錨定特殊細(xì)胞類型,例如特定的receptor/promotor/geneticmarker2.單細(xì)胞的空間分辨率,可以分析細(xì)胞在空間內(nèi)的mapping和編碼信息3.動(dòng)物可在大范圍的曠場內(nèi)自由活動(dòng)4.長時(shí)程追蹤同一細(xì)胞的放電規(guī)律變化:用于學(xué)習(xí),記憶,藥物成癮等研究。5.可對(duì)腦內(nèi)的深部核團(tuán)進(jìn)行記錄nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)成像效果好。神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)技術(shù)參數(shù)專業(yè)的數(shù)據(jù)采集軟件Inscopix數(shù)據(jù)采集軟件可記錄成百上千個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞。電子調(diào)焦功能,可通過軟件實(shí)現(xiàn)物理調(diào)焦。美國神經(jīng)細(xì)胞鈣成像生產(chǎn)廠家鈣成像技術(shù)利用鈣離子流的優(yōu)勢(shì)在活神經(jīng)細(xì)胞上直接可視化鈣信號(hào)。
轉(zhuǎn)基因Ca2+指示劑:轉(zhuǎn)基因技術(shù)和光遺傳技術(shù)的飛速發(fā)展,催生了基因編碼的Ca2+指示劑(GECIs)。它們不依賴于熒光染料,可以靶向特定的組織,如神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞、T細(xì)胞等,并且可以避免熒光指示劑帶來的的許多問題,是監(jiān)測轉(zhuǎn)基因動(dòng)物體內(nèi)鈣離子的一個(gè)極好的工具。個(gè)基因編碼的鈣離子指示劑Cameleon早在1997年就發(fā)表了。它是利用與鈣離子結(jié)合后發(fā)生結(jié)構(gòu)變化,作為供體的CFP和作為受體的YFP之間產(chǎn)生FRET的原理。2000年,GCaMP誕生了。它是增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)和鈣調(diào)蛋白(結(jié)合鈣離子)、鈣調(diào)蛋白結(jié)合肽M13組成的,結(jié)合鈣離子后,鈣調(diào)素-M13相互作用引起GFP空間結(jié)構(gòu)變化,發(fā)出綠色熒光(圖5)。GCaMP的問世有著**性的意義,它改變了我們觀察神經(jīng)元群體活動(dòng)的方式,讓科學(xué)家們可以在成千上萬的細(xì)胞中,看到哪些神經(jīng)元在放電,它們放電的模式和規(guī)律是怎樣的,從而進(jìn)一步探索各種內(nèi)在的神經(jīng)機(jī)制。
鈣離子成像系統(tǒng):傳統(tǒng)的寬場熒光顯微鏡由于光散射的影響,只能夠?qū)Υ竽X淺層的神經(jīng)元或在離體組織上進(jìn)行成像,共聚焦顯微鏡由于光損傷較大,一般也只用于離體鈣成像。隨著熒光顯微鏡技術(shù)的迅速發(fā)展,在體鈣成像技術(shù)得到了蓬勃發(fā)展。雙光子熒光顯微鏡能夠在進(jìn)行成像的時(shí)候?qū)崿F(xiàn)高分辨率和高信噪比。例如,用雙光子顯微鏡對(duì)海馬樹突棘的鈣離子信號(hào)進(jìn)行成像,研究神經(jīng)元突觸后長時(shí)程控制(Wangetal.,2000);觀察小鼠運(yùn)動(dòng)皮層神經(jīng)元在嗅覺選擇任務(wù)中刺激相關(guān)電位(Komiyamaetal.,2010)等等。不過,這些實(shí)驗(yàn)還是需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行麻醉和固定,而神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域很多研究更希望能夠?qū)ψ杂苫顒?dòng)的動(dòng)物進(jìn)行研究。近年來出現(xiàn)了通過植入性的microscope或microlens進(jìn)行freelymoving動(dòng)物鈣成像的技術(shù)。如圖6中所示的光纖成像法:使用一端帶有GRINlens的光纖連接顯微鏡和動(dòng)物大腦,從特定腦區(qū)發(fā)出的熒光信號(hào)被光纖收集,然后通過相機(jī)成像。動(dòng)物頭部只需植入GRINlens,方便活動(dòng),而且可以同時(shí)植入多個(gè)lens來觀察不同的腦區(qū)之間的聯(lián)系和相互作用。不過這種成像方法的視野較小,分辨率也比較差。鈣成像相關(guān)儀器設(shè)備設(shè)計(jì)團(tuán)隊(duì)一直在研究并提高系統(tǒng)成像幀速、系統(tǒng)信號(hào)水平。
對(duì)于雙光子(2P)鈣成像而言,離焦和近表面熒光激發(fā)是兩個(gè)大的深度限制因素,而對(duì)于三光子成像這兩個(gè)問題大大減小,但是三光子成像由于熒光團(tuán)的吸收截面比2P要小得多,所以需要更高數(shù)量級(jí)的脈沖能量才能獲得與2P激發(fā)的相同強(qiáng)度的熒光信號(hào)。功能性三光子顯微鏡比結(jié)構(gòu)性三光子顯微鏡的要求更高,它需要更快速的掃描,以便及時(shí)采樣神經(jīng)元活動(dòng);需要更高的脈沖能量,以便在每個(gè)像素停留時(shí)間內(nèi)收集足夠的信號(hào)。復(fù)雜的行為通常涉及到大型的大腦神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),該網(wǎng)絡(luò)既具有局部的連接又具有遠(yuǎn)程的連接。要想將神經(jīng)元活動(dòng)與行為聯(lián)系起來,需要同時(shí)監(jiān)控非常龐大且分布guangfan的神經(jīng)元的活動(dòng),大腦中的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)會(huì)在幾十毫秒內(nèi)處理傳入的刺激,要想了解這種快速的神經(jīng)元?jiǎng)恿W(xué),就需要MPM具備對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行快速成像的能力。快速M(fèi)PM方法可分為單束掃描技術(shù)和多束掃描技術(shù)鈣成像技術(shù)的不斷進(jìn)步,使得人們對(duì)神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域有了進(jìn)一步的拓展。哈爾濱神經(jīng)細(xì)胞鈣成像哪個(gè)好
鈣信號(hào)在大腦皮層中更能反映神經(jīng)元的活性,因此神經(jīng)元鈣信號(hào)的檢測對(duì)研究大腦皮層功能至關(guān)重要。美國神經(jīng)細(xì)胞鈣成像生產(chǎn)廠家
鈣成像技術(shù)通常使用熒光染料或報(bào)告基因來標(biāo)記細(xì)胞中的鈣離子。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時(shí),鈣離子會(huì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),導(dǎo)致熒光染料或報(bào)告基因發(fā)出光信號(hào)。通過觀察光信號(hào)的強(qiáng)度和分布,可以推斷出鈣離子的濃度和分布情況。鈣成像技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):高靈敏度:可以檢測到細(xì)胞內(nèi)微小的鈣離子濃度變化。實(shí)時(shí)性:可以實(shí)時(shí)記錄鈣離子濃度的變化過程。空間分辨率高:可以清晰地觀察到鈣離子在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。無創(chuàng)性:可以通過huo體成像技術(shù)觀察動(dòng)物體內(nèi)的鈣離子變化情況??芍貜?fù)性:可以對(duì)同一群體細(xì)胞進(jìn)行多次成像,以評(píng)估不同處理或刺激的影響??傊?,鈣成像技術(shù)是一種強(qiáng)大的生物醫(yī)學(xué)研究工具,可以幫助科學(xué)家們更好地了解細(xì)胞生理和病理狀態(tài),為疾病診斷和zhi療提供有力支持。美國神經(jīng)細(xì)胞鈣成像生產(chǎn)廠家