細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,參與細胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結(jié)團。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強,適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方(g/L)天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用**分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。其***是營養(yǎng)成分豐富,培養(yǎng)效果良好,但缺點是成分復(fù)雜,來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前***使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種**提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少。DMEM高糖培養(yǎng)基有助于細胞快速恢復(fù)生長。青海1640RPMI細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)
才能滿足新細胞合成、細胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。細胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助營養(yǎng)物質(zhì)等。此外,還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。水是細胞的主要成份,也是細胞賴以生存的主要環(huán)境。細胞培養(yǎng)液中90%以上的成份是水。細胞對水的品質(zhì)非常敏感,水的品質(zhì)將直接影響細胞培養(yǎng)的效果。而水中通常含有重金屬、氯、磷、有機物、熱原等污染物,細胞培養(yǎng)用水須經(jīng)過純化,品質(zhì)應(yīng)符合***典注射用水標準或者超純水的標準。能源和碳源是用于維持細胞生命和支持細胞生長,主要包括糖、糖酵解的產(chǎn)物和谷氨酰胺,其他氨基酸是次要的能源和碳源物質(zhì)。細胞能夠利用的糖類主要是六碳糖,目前大多體外培養(yǎng)時選取葡萄糖作為細胞的主要碳源和能量來源,因此細胞培養(yǎng)基中基本都含有葡萄糖,含量一般為5~25mmol/L。在葡萄糖濃度較高時,細胞主要通過擴散作用吸收葡萄糖,細胞膜內(nèi)外的葡萄糖濃度梯度是細胞吸收葡萄糖的動力;在葡萄糖濃度較低時,主要由鈉離子推動的高親和性轉(zhuǎn)運過程使細胞攝取葡萄糖。葡萄糖進入細胞后參與糖酵解、核酸代謝、糖原合成、能量代謝以及一些氨基酸的合成。與體內(nèi)的能量供應(yīng)途徑不同。陜西F12細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)無血清培養(yǎng)基提供了無血清的純凈環(huán)境。
水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物,含豐富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成(采用平衡鹽溶液溶解)與合成培養(yǎng)基(如MEM細胞培養(yǎng)基)以1:1的比例混合使用。目前用于細胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或**生長活性是達到生理平衡的。此外,血清含一些對細胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、*****等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。目前,血清多作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用,使用濃度一般為5~20%,**常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份復(fù)雜,批間差異大及存在**等外源污染風(fēng)險,對下游生物制品的分離純化和安全性都存在較大的影響,在生物制*行業(yè)的使用也越來越少。因此,基于對血漿成份的分析,合成細胞培養(yǎng)基應(yīng)運而生。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計、配制的培養(yǎng)基。
細胞培養(yǎng)基的類型:基礎(chǔ)培養(yǎng)基:如DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)和RPMI 1640,用于不同類型的細胞培養(yǎng)。DMEM:含有較高濃度的葡萄糖(如4500mg/L)、氨基酸、維生素和微量元素等營養(yǎng)物質(zhì),適用于多種哺乳動物細胞系的培養(yǎng)。RPMI 1640:含有較低濃度的葡萄糖(如2000mg/L),適用于淋巴細胞、骨髓細胞、白血病細胞等多種類型的哺乳動物細胞系的培養(yǎng)。減血清培養(yǎng)基:通過高濃度營養(yǎng)物質(zhì)和特定因子減少對血清的依賴,降低實驗變異性。無血清培養(yǎng)基:完全用特定營養(yǎng)和生長因子配方替代血清,適用于需要高度控制的研究,如重組蛋白和病毒載體的生產(chǎn)。MEM培養(yǎng)基在細胞生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。
以及無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基專門針對淋巴細胞培養(yǎng)設(shè)計,含有BSS、21種氨基酸、維生素等,***適于多種正常細胞和腫*細胞的培養(yǎng),也用做懸浮細胞培養(yǎng)。HamF12細胞培養(yǎng)基含微量元素,可在血清含量低時用,適用于克隆化培養(yǎng)。F12適用于CHO細胞,也是無血清細胞培養(yǎng)基中常用的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。DMEM/F12細胞培養(yǎng)基將DMEM和F12按照1:1比例混合,混合后營養(yǎng)成份豐富,血清使用量也減少。常作為開發(fā)無血清細胞培養(yǎng)基時的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。與天然培養(yǎng)基相比,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代,因此,細胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,以克服合成培養(yǎng)基的不足。**普遍的做法是添加5~10%的血清,這樣才能維持細胞活力,促進細胞增殖。針對不同的動物細胞,現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化、個性化的低血清細胞培養(yǎng)基配方,營養(yǎng)成份更加豐富,血清使用量可降低至1~3%,由此可減少了血清等動物來源成份對生物制品安全性的影響。(serumfreemedium,SFM)經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當今細胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本,簡化分離純化步驟,避免**污染造成的危害。DMEM高糖培養(yǎng)基適合用于基因編輯研究。河南無血清細胞培養(yǎng)基供應(yīng)商
減血清培養(yǎng)基減少了實驗中的血清干擾。青海1640RPMI細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)
細胞培養(yǎng),作為生物醫(yī)學(xué)研究和藥物開發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),指的是將細胞從生物體內(nèi)取出并在特定的人工環(huán)境中培育的過程。這一過程中,細胞培養(yǎng)基扮演著至關(guān)重要的角色,它為細胞提供了生長和增殖所必需的多種營養(yǎng)成分,如氨基酸、維生素、無機鹽和碳源等。在市場上,有多種基礎(chǔ)培養(yǎng)基可供選擇,如DMEM、RPMI1640和MEM等。這些培養(yǎng)基通常還需額外添加血清,以提供生長因子和附著因子,從而促進細胞的生長和貼壁。然而,血清的使用也帶來了一些問題,如實驗結(jié)果的變量增加和潛在的污染風(fēng)險。青海1640RPMI細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)